一、紫外檢測(cè)器與示差檢測(cè)器原理
紫外：只要具有光吸收的都可以.，示差：存在光的對(duì)比差或折射率
紫外吸收檢測(cè)器 ultraviolet absorption detector 簡(jiǎn)稱(chēng)紫外檢測(cè)器（UV），是基于溶質(zhì)分子吸收紫外光的原理設(shè)計(jì)的檢測(cè)器。工作原理是Lambert-Beer定律，即當(dāng)一束單色光透過(guò)流動(dòng)池時(shí)，若流動(dòng)相不吸收光，則吸收度A與吸光組分的濃度C和流動(dòng)池的光徑長(zhǎng)度L成正比。很多有機(jī)分子都具紫外或可見(jiàn)光吸收基團(tuán)，有較強(qiáng)的紫外或可見(jiàn)光吸收能力，因此UV-VIS檢測(cè)器既有較高的靈敏度，也有很廣泛的應(yīng)用范圍，是液相色譜中應(yīng)用泛的檢測(cè)器，幾乎所有液相色譜儀都配置了這種檢測(cè)器。
由于UV-VIS對(duì)環(huán)境溫度、流速、流動(dòng)相組成等的變化不是很敏感，所以還能用于梯度淋洗。一般的液相色譜儀都配置有UV-VIS檢測(cè)器。用UV-VIS檢測(cè)時(shí)，為了得到高的靈敏度，常選擇被測(cè)物質(zhì)能產(chǎn)生吸收的波長(zhǎng)作檢測(cè)波長(zhǎng)，但為了選擇性或其它目的也可適當(dāng)犧牲靈敏度而選擇吸收稍弱的波長(zhǎng)，另外，應(yīng)盡可能選擇在檢測(cè)波長(zhǎng)下沒(méi)有背景吸收的流動(dòng)相。
示差檢測(cè)是通用型檢測(cè)器，主要是依據(jù)不同溶液的折光率來(lái)鑒定的，凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測(cè)器檢測(cè)。折射率的大小表明了介質(zhì)光學(xué)密度的高低。對(duì)于偏轉(zhuǎn)式的示差折光檢測(cè)器，光路在通過(guò)兩個(gè)裝有不同液體的檢測(cè)池時(shí)發(fā)生偏轉(zhuǎn)，偏轉(zhuǎn)的大小與兩種液體之間折光率的差異成比例。光路的偏轉(zhuǎn)由光敏元件上的位移測(cè)得，顯示了折光率的不同。在光學(xué)系統(tǒng)中采用了多種精密裝置，提高了運(yùn)行的穩(wěn)定性，也使檢測(cè)器更加精致。從鎢燈發(fā)射出的光束經(jīng)過(guò)聚光透鏡，狹縫1，準(zhǔn)直鏡和狹縫2檢測(cè)池，然后光被檢測(cè)池后的反光鏡反射，再通過(guò)檢測(cè)池、狹縫2、準(zhǔn)和零位玻璃調(diào)節(jié)器后在光敏元件上顯示出狹縫1的影象光敏元件上有兩個(gè)并排的光敏接收元件。目前，糖類(lèi)化合物的檢測(cè)大多使用此檢測(cè)系統(tǒng)（當(dāng)然現(xiàn)在糖類(lèi)elsd很普遍）。
二、用途
紫外檢測(cè)器對(duì)占物質(zhì)總數(shù)約80%的有紫外吸收的物質(zhì)均可檢測(cè)，即可測(cè)190--350 nm范圍的光吸收變化，也可向可見(jiàn)光范圍350---700 nm延伸，適用于大部分常見(jiàn)具有紫外吸收有機(jī)物質(zhì)和部分無(wú)機(jī)物質(zhì)。示差檢測(cè)是凡具有與流動(dòng)相折光率不同的樣品組分，均可使用示差折光檢測(cè)器檢測(cè)，如高分子化合物、糖類(lèi)、脂肪烷烴等都能夠檢測(cè)。在凝膠色譜中示差折光檢測(cè)器是的，尤其對(duì)聚合物，如聚乙烯、聚乙二醇、丁苯橡膠等的分子量分布的測(cè)定。它與紫外可見(jiàn)檢測(cè)器相比，靈敏度較低，一般不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫。
一般當(dāng)物質(zhì)在200-400nm有紫外吸收時(shí)，考慮用紫外檢測(cè)器，無(wú)吸收或吸收弱時(shí)可以考慮示差檢測(cè)器。
三、優(yōu)點(diǎn)
紫外優(yōu)點(diǎn)：常用、方便。 示差檢測(cè)器：弱吸收物質(zhì)定量準(zhǔn)確。
紫外吸收檢測(cè)器不僅有較好的選擇性和較高的靈敏度，噪音低，線性范圍寬，而且對(duì)環(huán)境溫度、流動(dòng)相組成變化和流速波動(dòng)不太敏感，因此既可用于等度洗脫，也可用于梯度洗脫。由于靈敏高，因此即使是那些光吸收小、消光系數(shù)低的物質(zhì)也可用UV檢測(cè)器進(jìn)行微量分析。
示差折光檢測(cè)器這一系統(tǒng)通用性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，屬于總體性能濃度型檢測(cè)器，其響應(yīng)值取決于柱后流出液折射率的變化，采用含有樣品的流出液和不含樣品的流出液的同一物理量的示差測(cè)量。其響應(yīng)信號(hào)與溶質(zhì)的濃度成正比，屬于中等靈敏度檢測(cè)器，檢測(cè)限可達(dá)1mg/ml－0.1mg/ml。它是目前液相色譜中常用的一種檢測(cè)器，可與、色譜柱、進(jìn)樣器等組成凝膠滲透色譜儀或高效液相色譜儀系統(tǒng)，也可以配置適當(dāng)?shù)倪M(jìn)樣系統(tǒng)作為單獨(dú)的分析儀器使用。它對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng)，某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物、糖類(lèi)、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè)。由于不同的液體折光不同，因此本檢測(cè)器通用性強(qiáng)，可廣泛地應(yīng)用于化工、石油、醫(yī)藥、食品等領(lǐng)域?yàn)榭蒲小⑸a(chǎn)服務(wù)。
四、區(qū)別
示差折光檢測(cè)器在原理上雖然是通用型檢測(cè)器，這一系統(tǒng)靈敏度低（檢測(cè)下限為10-7g／ml），流動(dòng)相的變化會(huì)引起折光率的變化，因此，它既不適用于痕量分析，也不適用于梯度洗脫樣品的檢測(cè)，對(duì)于HPLC來(lái)說(shuō)不是理想的檢測(cè)器。而UV檢測(cè)的主要缺點(diǎn)在于紫外不吸收的化合物靈敏度很低。
1.紫外是選擇性檢測(cè)器，示差是通用性檢測(cè)器；
2.紫外檢測(cè)器靈敏度高，示差檢測(cè)器靈敏度低；
3.紫外檢測(cè)器可進(jìn)行梯度洗脫，示差檢測(cè)器不能進(jìn)行梯度洗脫；
4.紫外檢測(cè)器對(duì)壓力和溫度不敏感，示差檢測(cè)器很敏感
五、紫外檢測(cè)器的波長(zhǎng)范圍是根據(jù)什么來(lái)的？
連續(xù)光源（氘燈）發(fā)出的光，通過(guò)狹縫、透鏡、光柵、反射鏡等光路組件形成單一波長(zhǎng)的平行光束。通過(guò)光柵的調(diào)節(jié)可得到不同波長(zhǎng)。波長(zhǎng)范圍應(yīng)該是根據(jù)光源來(lái)確定的，不同光源波長(zhǎng)范圍也不一樣。光波根據(jù)光的傳播頻率不一樣而劃分的。
六、示差檢測(cè)器的折射率范圍大小如何計(jì)算？是怎么來(lái)計(jì)算的？范圍越大越好還是越小越好？理由是什么？
根據(jù)稀溶液中相加和定律，溶液的折射率等于溶劑和溶質(zhì)各自的折射率乘以各自的摩爾濃度之和：n＝c0n0+cini
式中ni為溶質(zhì)的折射率，ci為溶質(zhì)的摩爾百分?jǐn)?shù)，c0為溶劑的摩爾百分?jǐn)?shù)。因?yàn)?/span>ci＋c0＝1，n越大，可測(cè)量的濃度范圍也越大。
七、示差檢測(cè)器的溫控范圍是怎么來(lái)的？范圍的大小對(duì)儀器的性能和檢測(cè)有什么好壞之處？
折光物質(zhì)由于溫度變化引起該物質(zhì)密度變化，進(jìn)而導(dǎo)致折射率的改變。常用有機(jī)溶劑折射率的溫度系數(shù)（dn/dT）在－1.05×10－4/度（水）和－6.4×10－4/度（苯）之間變化，平均值為－4.9×10－4/度。當(dāng)溫度變化10－4度時(shí)，折光率變化約在10－7RIU，這就意味著對(duì)于目前可接受的噪聲水平10－7RIU，需要將溫度控制在－10－4～＋10－4范圍之內(nèi)。溫度控制范圍越小，噪聲越低，信噪比就越大，越有利于檢測(cè)。
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