對(duì)制備液相色譜中的一些常用概念做一下介紹。
?。?）分析色譜的目的，是分析出混合物中一個(gè)（或者幾個(gè)）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時(shí)間與提高分離的效率，制備色譜的的進(jìn)樣品量很大，導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負(fù)荷的相應(yīng)加大，也就必須加大色譜柱填料，增大制備色譜的直徑和長度，使用的相對(duì)多的流動(dòng)相。
?。?）樣品的前處理：
（3）制備色譜柱的材質(zhì)及其特點(diǎn)
?。?）固定相的選擇：
?。?）裝柱方法的選擇根據(jù)固定相顆粒度和柱子的尺寸，采用不同的裝柱方法，往往裝填越好分離效果越好。
制備液相色譜中，有三個(gè)可以觀察到的狀態(tài)：柱壓、檢測(cè)器基線、譜圖。通過觀察和記錄這三個(gè)狀態(tài)可以監(jiān)測(cè)儀器是否正常。若某個(gè)狀態(tài)出現(xiàn)異常，故障排查和解決方案如下。
1、柱壓波動(dòng)
1）吸液管路進(jìn)氣泡①溶劑不足，吸濾頭吸入空氣，添加溶劑并排氣泡。②吸濾頭臟了或堵塞，用異丙醇（或5%稀硝酸）清洗。③溶劑中有氣泡（尤其兩種以上溶劑混合），超聲（或抽濾）脫氣。
2）泵流量不穩(wěn)①單向閥堵塞，大流速，若不能解決，則需拆下單向閥（異丙醇）超聲清洗清洗或更換單向閥。②柱塞密封圈磨損，更換密封圈。③泵頭污染，柱塞桿往復(fù)活動(dòng)受阻，清洗泵頭。
3）柱床塌陷，維修或更換色譜柱。
4）流動(dòng)相混合后吸放熱導(dǎo)致溫度變化，以致柱壓波動(dòng)，如乙腈和水混合吸熱，甲醇和水混合放熱。若影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，則增加柱溫箱或流動(dòng)相預(yù)混。
2、柱壓升高或超壓。逐段排查堵塞的位置：
1）先拆下色譜柱，接上兩通運(yùn)行，若是色譜柱堵塞：①進(jìn)樣后樣品析出，用合適的溶劑反沖色譜柱。②緩沖鹽析出，用大比例水相的流動(dòng)相沖洗色譜柱。③機(jī)械雜質(zhì)堵塞篩板，異丙醇小流速反沖色譜柱。④色譜柱污染嚴(yán)重，需維修或充填。
2）混合器堵塞，維修或更換。
3）六通閥堵塞，將泵液管路接到連接色譜柱的閥口處，將閥扳至load狀態(tài)，用易溶樣品的溶劑小流速?zèng)_洗。4）壓力傳感器故障，維修或更換。
3、檢測(cè)器基線波動(dòng)
1）基線有規(guī)律波動(dòng)，且幅度較大，則可能有氣泡持續(xù)進(jìn)入流通池。排查氣泡來源并用異丙醇沖洗檢測(cè)器或色譜柱。
2）基線小幅度規(guī)律波動(dòng)，可能是檢測(cè)器燈能量不足（能量下降后，低波長下靈敏度先下降。
3）基線漂移。①流動(dòng)相在此檢測(cè)波長下有吸收。更換流動(dòng)相或改變波長。②色譜柱或檢測(cè)池污染。以異丙醇沖洗色譜柱或檢測(cè)池，或?qū)z測(cè)池中透鏡玻片取出清洗。
4、譜圖重現(xiàn)性差1）檢查方法設(shè)置，包括流速、梯度、波長。
2）檢查流動(dòng)相配置是否有誤，A、B兩相是否放反。
3）檢查柱壓與之前是否有差異，若有變化，則前面1和2進(jìn)行排查。
4）進(jìn)樣前色譜柱是否*平衡好。
5）樣品溶解方法。
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