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微生物培養(yǎng)基手冊大全
1、營養(yǎng)瓊脂(普通瓊脂)
成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏湯) 100毫升
瓊脂(視天氣,瓊脂質量而定)
制法:將上物加熱溶解,補足水,調ph至7.6,過濾分裝121℃,高壓滅菌15分鐘。
用途:作普通瓊脂平皿。
2、*(BA)
制法:取營養(yǎng)瓊脂(PH7.6),加熱使其溶解待冷至45-50℃,以滅菌操作于每100毫升營養(yǎng)瓊脂加滅菌脫纖維羊血或兔血5-10毫升,輕輕搖勻,立即傾注于平板或分裝試管,制成斜面?zhèn)溆谩?br />用途:1. 一般棉拭子均接種此培養(yǎng)基。
2.尿液,膿液
3.分離細菌標本用。
3、基礎培養(yǎng)基 (肉膏湯BB)
成份:蛋白胨 10克 牛肉膏 5克
氯化鈉 5克 水 1000毫升
制法:將以上各物稱好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7.6,過濾分瓶,121℃高壓滅菌,20分鐘備用。
用途:1 作耐藥試驗,增菌用分裝小管。
2 作普通瓊脂斜面。
4、血液培養(yǎng)基(大管肉湯培養(yǎng)基)
成份:1 新鮮牛肉浸液 1000毫升
2 PABA(對氨基苯甲酸〔相當于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升
3 MgSO4 [相當于0.493/100毫升] 49.3% 1毫升
4 枸椽酸鈉 0.3g
制法:1 將1號,4號混合液,2號,3號液分裝高壓滅菌。
2 取滅菌1,4號混合液用無菌法加入PABA,MgSO4,再分管,行無菌試驗三天方可使用。
用途:作血,骨髓培養(yǎng)用。
5、腸道桿菌培養(yǎng)基(伊紅美蘭瓊脂)
成份: 蛋白胨 10克 乳糖 10克
氯化鈉 5克 瓊脂 25(22)克
水 1000毫升 2%伊紅溶液20毫升
0.5%美蘭溶液 20毫升
制法:將蛋白胨,氯化鈉瓊脂稱好,加水1000毫升使溶解,校正PH7.4過濾,補足失水,加入2%伊紅溶液20毫升,0.5%美蘭溶液20毫升,(115℃高壓20分鐘),冷卻至50℃左右傾注平板,凝固后存冰箱備用。(高壓以后方可再加乳糖)
用途:用作分離沙門氏,志賀氏菌屬,也作菌群調查。
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6、羅文斯坦培養(yǎng)基
成份:磷酸二氫鉀 2.4克 * 0.24克
枸椽酸鈉 0.6克 天門冬素 3.6克
純甘油(丙三醇) 12毫升 水 600毫升
馬鈴薯粉 30克 雞蛋 1000毫升(約3公斤)
2%孔雀綠水溶液 20毫升
制法:1 除雞蛋外(還有孔雀綠)??蓪⑵渌锲贩Q好,放入大三角瓶包扎好,高壓滅菌。
2 雞蛋用75%酒精泡30分鐘,滅菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的滅菌三角燒瓶內充分將雞蛋搖散。
3 將各成份按比例配好,分裝每管約5毫升。
4 間歇滅菌*次90℃1小時,第二次80℃半小時,第三次80℃半小時(或放85℃烤箱內連續(xù)二次)。
質控標準: 1 滅菌試驗合格。
2 接種結核桿菌要求兩星期生長良好。
用途:作結核分枝桿菌培養(yǎng)用。
7、結核半固體培養(yǎng)基
成份:* 19克 * 0.6克
磷酸二氫鉀 2.5克 天門冬素 5克
1%孔雀綠 1.5克 甘油 20毫升
吐溫80(10%) 5毫升 水 1000毫升
枸椽酸鈉 2.5克 動物血清 100毫升
瓊脂 1.5克(80小時用甲醇去脂)
1%孔雀綠 0.78毫升 吐溫80(10%) 5毫升
加動物血清 100毫升
制法: 1 除血清外將上述藥品均稱好,放入煮沸溶解,調PH7。2
2 分管(每管約10毫升)包扎好,高壓,121℃半小時滅菌。
3 待冷后無菌法加無菌血清(綿羊血或兔血)每管約1毫升備用。
4 去除瓊脂方法:取瓊脂若干或于三角燒瓶中加甲醇于瓊脂1毫升用塞密封,放37℃溫浴80小時,每天搖動一次,冷卻后到時取出用濾紙過濾,待瓊脂自然冷卻后備用。
質控標準:1無菌實驗合格。
2瓊脂硬度合適而清亮。
3接種標準結核桿菌用,強度合適即可用。
用途:培養(yǎng)結核桿菌用。
8、亞碲酸鉀*
成份:瓊脂基礎 100毫升 1 0%葡萄糖 2毫升
1%亞碲酸鉀 4.5毫升 綿羊血 10毫升
制法:1將瓊脂基礎溶解好,加入羊血。
2馬上加熱使成咖啡色后,稍冷再加入10%葡萄糖2毫升與1%亞碲酸4.5毫升混合后倒入無菌平板,凝固后存冰箱備用。
質控標準:接種白喉桿菌生長良好,其它革蘭氏陰性菌均抑制生長。
用途:供培養(yǎng)及鑒別白喉桿菌用。
9、米培養(yǎng)基
成份:白米 20克 水 1000毫升
瓊脂 20克 吐溫80 10毫升
制法:1將20克米加水200毫升煮沸45分鐘,煮時將容器蓋好。
2用紗布過濾,只要米湯,不要飯,加水至1000毫升。
3加瓊脂20克,吐溫-80 10毫升煮溶,分裝中型管(每管約3毫升),包扎好,高壓,121℃半小時,消毒備用。
質控標準:1滅菌。
2要求清亮。
3接種白色念珠菌17-24小時生長良好,并產(chǎn)生厚膜孢子。
用途:培養(yǎng)白色念珠菌用。
10、蛋白胨水培養(yǎng)基
成份:蛋白胨 1克 氯化鈉 0.5克
水加至 100毫升 PH調至 7.8
制法:把以上各物稱好溶于水,調節(jié)PH7.6分裝消毒備用。
質控標準:1 放置37℃無菌生長。
2 接種大腸桿菌24小時生長良好。
3 可作中國蘭平板基礎液。
可作靛基質基礎液(作此試驗需要*蛋白胨)。
11、血培養(yǎng)基
成份:蛋白胨 10克 牛肉膏 5克
氯化鈉 5克 葡萄糖 3克
枸椽酸鈉 3克 MgSO4。7H2O 20毫升
0.5%PABA 10毫升 酵母浸液 10毫升 0.2克(2%過濾)
*酚紅0.4% 6毫升 水 1000毫升
瓊脂 0.5克
*:作大BB,小BB時,不要加酚紅和瓊脂。
制法:1、除PABA、*、酚紅外均稱好煮化調PH7.4
2、調好PH后再加酚紅。
3、*、PABA另外無菌再加入(亞細,小BB)
12、沙氏培養(yǎng)基
成份:蛋白胨 1克 水 100毫升
瓊脂 1.5克(瓊脂粉1克%) 葡萄糖或麥芽糖 4克
制法:1將上述物質稱好,放入水中煮沸溶解(不必調PH即有5左右)分中號試管(約4毫升)包扎,高壓115℃20分鐘。
2 趁熱斜好,凝固備用。
質控標準:1無菌試驗合格。
2接種霉菌比在其它培養(yǎng)基上生長良好,其它菌生長不好。
用途:作分離培養(yǎng)霉菌用。
注意:1 接種臨床新鮮標本可先加1-2滴70%酒精讓干后再接種于含12.5%*沙氏斜面培養(yǎng)基上。
2 也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麥芽糖。
13、肉渣培養(yǎng)基
成份: 牛肉渣 牛肉浸液(牛肉膏)
制法:將做牛肉浸液的牛肉渣,裝入試管,高約3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏湯(PH7.6)約5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高約0.5厘米(不加也可),121℃高壓滅菌20-30分鐘后保存于冰箱內備用 。
用途:用于厭氧菌培養(yǎng)。
注意:如無肉渣也可用牛、羊血等代替,將血塊先放入水內煮沸,取出成小塊,血塊在加熱后搖勻成碎顆粒狀。
14、單糖發(fā)酵管培養(yǎng)基(半固體)
成份: PH7.6-7.8蛋白胨水 1000毫升(0.3克/100毫升)
1.2%酚紅液 0.4毫升
瓊脂 0.4 - 0.5克
10%糖或醇 10毫升
制備:把蛋白胨水,瓊脂加熱溶解,然后加1.2%酚紅液0.4毫升,10%糖10毫升,混勻,分裝試管,每管約2-3毫升,經(jīng)115℃高壓滅菌20分鐘后,分置于試管架上,貼上各類糖或醇類標簽備用。
質控標準:細菌發(fā)酵糖類或醇而產(chǎn)生酸,能使培養(yǎng)基PH改變,指示劑由紅變黃色,如因發(fā)酵產(chǎn)生氣體則半固體內產(chǎn)生氣泡,如有動力則半固體由清亮變混濁。
15、明膠培養(yǎng)基
成份:肉浸液 1000毫升(牛肉浸膏5克)
明膠 12克
制法:
100毫升肉浸液中,加入明膠12克,隔水加熱煮化,校正PH7.2,分裝小號試管,用阿諾氏間歇滅菌80℃30分鐘,連續(xù)3日,或者108℃高壓20分鐘,冷卻,貯存?zhèn)溆谩?/p>
15-1、堿性蛋白胨水
成份:
蛋白胨 20克 氯化鈉 5克
硝酸鉀 0.1克 結晶碳酸鈉(NaclCO3.12H2O) 0.2克
水 1000毫升
制法:將蛋白胨,Nacl,硝酸鉀,結晶碳酸鈉稱好,溶于1000DW中,校正PH8.4分裝試管,121℃高壓滅菌15分鐘后備用 。
用途:用于霍亂弧菌培養(yǎng)。
16、葡萄糖蛋白胨水(M。V用)
成份:蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
K2HPO4 5克 水 1000毫升
制法:將上述稱好溶解分裝試管,調PH7.4高壓滅菌115℃ 滅菌20分鐘 ,或者葡萄糖加熱煮沸后再倒試管
標準:滅菌試驗合格。接種大腸桿菌VP陰性,M陽性;接種產(chǎn)氣桿菌VP陽性,M陰性。
用途:作鑒別腸道桿菌用。
17、枸椽酸鹽培養(yǎng)基
成份:磷酸二氫銨 0.1克 * 0.02克
* 0.1克 枸椽酸鈉 0.23--0.5克(0.36)
氯化鈉 0.5克 瓊脂 1.5克
0.5%溴*蘭2毫升 (調PH6.8再加)
制法:將上述稱好,放入水中煮沸溶解,調PH6.8,然后分裝中號試管,高壓滅菌,趁熱倒呈斜面,凝固
后備用。
標準:1、滅菌試驗合格,培養(yǎng)基呈果綠色適宜。
2、接種大腸桿菌,培養(yǎng)基上不生長,也不變色。
3、接種產(chǎn)氣桿菌,培養(yǎng)基呈深蘭色。
用途:作鑒別大腸桿菌用。
18、雙糖鐵培養(yǎng)基
成份:
下層:蛋白胨 1克 氯化鈉 0.5克
葡萄糖 0.2克 瓊脂 0.3-0.5克
水 100毫升
將上述物質混勻調PH7.6后加1.2%酚紅0.4毫升
上層:蛋白胨 1克 氯化鈉 0.5克
乳糖 1克 * 0.03克
* 0.02克 瓊脂 1克
水 100毫升
制法: 1將下層配好,分裝中號試管(1毫升),塞好包扎,15磅高壓滅菌半小時,使凝固后備用。
2制上層時,先將蛋白胨水制好,加入*,*,加熱溶解PH8.1,再加入酚紅分瓶,(每瓶300毫升,稱取瓊脂包扎滅菌,趁熱加入乳糖隔水煮沸30分鐘或112℃消毒15分鐘)。
3取已制的下層管,每管用無菌法倒入上層液約1。5毫升,邊斜放置使成斜面,凝固后備用。
標準:無菌試驗合格,接種大腸桿菌下層產(chǎn)酸產(chǎn)氣,上層產(chǎn)酸。
19、尿素培養(yǎng)基
成份:蛋白胨 0.1克 氯化鈉 0.5克
磷酸二氫鉀 0.2克 尿素 0.2克(或10%2毫升)
葡萄糖 0.01克(或10%葡萄糖0.1毫升)
H2O 100毫升 酚紅(0.2%) 0.4毫升
制法:1除葡萄糖,尿素外把其它藥品稱好放入水中煮沸,使溶解,調PH7.2過濾,15磅高壓滅菌15分鐘.
2配制尿素(滅菌)液:每100毫升基液內加2毫升.
3配制10%葡萄糖(滅菌)每100毫升加0.1毫升.
4分裝小試管待用.
標準:
1滅菌試驗合格.
2接種變形桿菌24小時呈紅色.
用途:鑒定變形桿菌用.
20、膽鹽中性紅瓊脂
成份:蛋白胨瓊脂PH7.2-7.4 5000毫升
膽 鹽 2.5克
乳糖 5.0克
對氨基苯甲酸 25毫克
1%中性紅溶液 25毫升
制法:
將膽鹽,對氨基苯甲酸,乳糖趁熱加入已滅菌之蛋白胨瓊脂中,待冷至50-60℃時,加入1%中性紅液2.5毫升,混合后即傾注平皿,凝固待用.
*:1%中性紅:1克中性紅加酒精60毫升,加水40毫升
21、丙二酸鹽培養(yǎng)基(縮蘋果酸鈉)
成份:丙二酸鈉 0.3克 酵母浸膏 0.1克
Nacl 0.2克 硫酸銨 0.2克
K2HPO4 0.06克 KH2PO4 0.04克
水 100毫升
PH6.8,高壓滅菌備用.
0.2%溴麝香酚蘭乙醇 1.25毫升
制法:與枸椽酸鹽利用試驗相類似,是測定細菌能否利用丙二酸鹽與碳源.無機銨鹽為氨源而生長,生長者使培養(yǎng)基變成堿呈蘭色.
鑒定: 克氏桿菌 (+) 赫夫尼亞 (+)
沙門氏菌 (—) 痢疾桿菌 (—)
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