氣單胞菌通用PCR試劑盒的PCR反應(yīng)條件設(shè)置

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來源：上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 2020年05月21日 13:41

氣單胞菌通用PCR試劑盒的PCR反應(yīng)條件設(shè)置：

a）預(yù)變性：95℃，5 min可以讓白細(xì)胞裂解，釋放可用于PCR擴(kuò)增的基因組DNA。請(qǐng)勿縮短時(shí)間或降低溫度。

b）退火溫度：退火溫度設(shè)置為引物Tm值即可。然而，使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴(kuò)增，并提高全血模板的擴(kuò)增效率。因此，如擴(kuò)增產(chǎn)物特異性較差，可以建立一個(gè)溫度梯度反應(yīng)去尋找引物模板適退火溫度。

c）延伸時(shí)間：按30 sec/kb設(shè)定，如不足30 sec，設(shè)置30 sec即可。

d）擴(kuò)增循環(huán)數(shù)：35個(gè)循環(huán)已可以擴(kuò)增足量產(chǎn)物。太多的循環(huán)將會(huì)導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加。

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