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                                     ELISA試劑盒操作問題

1.一次ELISA實驗需要多長時間？

雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時，競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。

2.血清樣本如何處理？

全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 血漿樣本如何處理？

建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

4.細胞上清液樣本如何處理？

檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細收集上清。

5.細胞裂解液樣本如何處理？

檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或者超聲破碎，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右（5000×g）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6.組織樣本如何處理？

用預(yù)冷的PSB （0.01M,pH=7.4）沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測。

7.為什么有的試劑盒是采用競爭ELISA法？

小分子抗原或半抗原因為缺乏可作夾心法的兩個以上的位點，因此不能用雙抗體夾心法進行測定，可以采用競爭法。其原理是標本中的抗原和固相載體上的抗原競爭生物素化抗體上的結(jié)合位點，標本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少，*后的顯色也愈淺，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測定多用此法。

8.用什么軟件處理ELISA檢測的數(shù)據(jù)比較好？

ELISA標準曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中。軟件可以在下載中心進行下載。

9. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦？

實驗結(jié)果不理想請及時與客服或技術(shù)支持聯(lián)xi，我們可以幫您一起分析實驗結(jié)果。如果僅憑實驗數(shù)據(jù)無法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進行售后檢測。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題，可以為您退換貨；如果是實驗操作的問題，技術(shù)人員可以給您一些改進的建議。