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ELISA試劑盒供應(yīng)商包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其辨認(rèn),所以保存抗原很重要,我做重組蛋白時(shí),師兄都嚴(yán)厲正告我必定要在冰浴下緩慢消融就是這個(gè)道理。封suo就是讓很多不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地閑暇,然后排擠ELISA后的過(guò)程中攪擾物質(zhì)的再吸附。但有時(shí)由于實(shí)驗(yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。
應(yīng)留心以下原理:由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是經(jīng)過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體外表的疏水基團(tuán)間的效果,這種物理吸附長(zhǎng)短特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)一般含有更多的疏水基團(tuán),故更易吸附到固相載體外表。小分子必需依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才干固定在固相載體上。
還有有的包被原可能不是蛋白,關(guān)于生物素和脂類(lèi)物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事前對(duì)其改造再加以包被,親和素生物素:先親和素先包被載體,參加生物素化的DNA,這種包被辦法均勻、結(jié)實(shí),已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。常用的包被液除了剛才說(shuō)到的pH9.6碳酸鹽緩沖液,還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
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