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測(cè)定抗原或抗體方法中的三個(gè)必要條件:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑。
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate)。
(3)酶反應(yīng)的底物,根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不類型的檢測(cè)方法。
ELISA試劑盒直接法和間接法優(yōu)缺點(diǎn)比較:
1、直接法:將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標(biāo)記的一級(jí)抗體,即可測(cè)定抗原總量,此一級(jí)抗體的特異性非常重要。
1)優(yōu)勢(shì):操作手續(xù)簡(jiǎn)短,因無(wú)須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
2)缺點(diǎn):試驗(yàn)中的一抗都得用酶標(biāo)記,但不是每種抗體都適合做標(biāo)記,費(fèi)用相對(duì)提高。
2、間接法:此測(cè)定方法與直接法類似,差別在于一級(jí)抗體沒(méi)有酶標(biāo)記,改用酶標(biāo)記的二級(jí)抗體去辨識(shí)一級(jí)抗體來(lái)測(cè)定抗原量。
1)優(yōu)勢(shì):二抗可以加強(qiáng)信號(hào),而且有多種選擇能做不同的測(cè)定分析,不加酶標(biāo)記的一級(jí)抗體則能保留它多的免疫反應(yīng)性。
2)缺點(diǎn):交互反應(yīng)發(fā)生的機(jī)率較高。
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