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在微生物檢驗(yàn)操作過(guò)程中，要保證檢測(cè)環(huán)境及所用工器具的潔凈程度，同時(shí)保證人員各種操作的規(guī)范性，盡量保證其無(wú)菌性，防止因人為原因操作失誤而出現(xiàn)誤差結(jié)果，同時(shí)在適宜溫度進(jìn)行培養(yǎng)，為合理決策和指導(dǎo)生產(chǎn)提供依據(jù)。

為保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，我們應(yīng)做好以下幾個(gè)方面。

一、培養(yǎng)基的滅菌及使用

1.每次配制時(shí)，要注意其生產(chǎn)日期是否在保質(zhì)期內(nèi)，查看其開(kāi)瓶日期及瓶口密封性，保證其未變質(zhì)，并且未吸潮。

2.培養(yǎng)基配制時(shí)，稱量要準(zhǔn)確，包括鹽水的分裝要準(zhǔn)確。

3.一定要保證現(xiàn)配制現(xiàn)滅菌，未滅菌的配好培養(yǎng)基不能長(zhǎng)時(shí)間放置，更不可隔夜。

4.滅菌時(shí)要保證恒溫、恒壓，同時(shí)要保證有效的滅菌時(shí)間。

5.滅菌過(guò)的培養(yǎng)基要冰箱保存，可保存一周，一般不超過(guò) 3 天。而且要遵循“先入先出”原則，先配制的要先使用。

6.在使用時(shí)，要根據(jù)當(dāng)班次的使用量，用水浴鍋先將培養(yǎng)基溶化為液態(tài)，然后及時(shí)調(diào)低水浴溫度（先化好的可從水浴取出，放在水浴鍋鍋蓋上）待用，千萬(wàn)不可長(zhǎng)時(shí)間使培養(yǎng)基處于高溫狀態(tài)。

7.做產(chǎn)品微生物檢測(cè)時(shí)，傾倒培養(yǎng)基溫度在 45℃左右，不可過(guò)燙，避免將菌燙死；也不可過(guò)涼，化好的培養(yǎng)基又結(jié)塊凝固，不便于觀察結(jié)果。

8.每瓶培養(yǎng)基均要做空白。

9.盡量集中做樣，避免頻繁打開(kāi)同一瓶培養(yǎng)基瓶塞，增大培養(yǎng)基的污染幾率，出現(xiàn)誤差結(jié)果。

10.培養(yǎng)基剩余過(guò)少時(shí)，可先將其傾倒成空白用板。

二、檢測(cè)環(huán)境的維持

1、大環(huán)境（檢測(cè)室）

檢測(cè)時(shí)，窗戶和空調(diào)要關(guān)閉，或用酒精對(duì)房間進(jìn)行噴霧消毒，避免房間內(nèi)空氣流通影響超凈臺(tái)內(nèi)部環(huán)境（在有通排風(fēng)系統(tǒng)的恒溫恒濕無(wú)菌間進(jìn)行操作）。

如果在原來(lái)的原料微生物檢測(cè)室進(jìn)行檢測(cè)，要定期開(kāi)啟紫外燈，對(duì)房間進(jìn)行殺菌。

2、小環(huán)境（超凈工作臺(tái)）

定期清潔初效過(guò)濾器，要及時(shí)更換。

檢測(cè)前，將超凈臺(tái)內(nèi)部進(jìn)行清潔，用 75%酒精進(jìn)行擦拭消毒，并提前半小時(shí)將超凈臺(tái)紫外燈打開(kāi)，對(duì)超凈臺(tái)內(nèi)部環(huán)境進(jìn)行殺菌。

關(guān)紫外燈，開(kāi)風(fēng)機(jī)，調(diào)整合適進(jìn)風(fēng)量，風(fēng)量不可過(guò)低。

每次檢測(cè)后，要對(duì)超凈臺(tái)內(nèi)部進(jìn)行清理、清潔，并用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。

紫外燈根據(jù)其使用壽命要及時(shí)更換。

檢測(cè)同時(shí)，要做上相應(yīng)菌落檢測(cè)的環(huán)境空白。

檢測(cè)區(qū)域的選擇：

a、一般在距離超凈臺(tái)外沿的 1/3-2/3 區(qū)域進(jìn)行無(wú)菌操作；

b、要在酒精燈火焰的外焰保護(hù)區(qū)域進(jìn)行操作。

三、工器具的潔凈度

1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌。

2.檢測(cè)用剪刀、勺子等物品要做到檢測(cè)，不可與其它操作器具混用，使用時(shí)，先用75%酒精消毒，再采用灼燒方式進(jìn)行滅菌。

3.接種針（環(huán)）采用灼燒方式進(jìn)行滅菌，但要注意檢測(cè)時(shí)要先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻。

四、樣品的采集及檢測(cè)

1、保證采樣器具的無(wú)菌性

玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌，保證恒溫、時(shí)間足夠（但不可時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，容易導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報(bào)廢）。

取樣筐：使用前要用75%酒精進(jìn)行噴灑消毒。

取樣勺：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。

取樣袋：可先用酒精進(jìn)行擦拭消毒，再在超凈臺(tái)用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。

電子天平表面用75%酒精消毒。

2、人員操作

保證手部的清洗、消毒：取樣前及檢測(cè)前都要先洗手再消毒。

取樣要具有代表性（隨機(jī)樣、目的樣、綜合樣）且要標(biāo)示清楚。

取樣完畢，不可在車間逗留，要及時(shí)將樣品放入超凈臺(tái)，對(duì)其外表面進(jìn)行紫外燈照射消毒。

在要求的檢測(cè)區(qū)域進(jìn)行操作。

檢測(cè)前，要用 75%酒精棉球?qū)悠反诓窟M(jìn)行擦拭消毒，再開(kāi)口。

往鹽水瓶加樣品時(shí)，要注意勺子或袋子盡量不接觸瓶口。

樣品計(jì)量要準(zhǔn)確，稀釋倍數(shù)也要準(zhǔn)確（1mL 吸管不允許將管口敲掉），進(jìn)行100 倍稀釋時(shí)，1mL 吸管要伸入鹽水中，不可以將樣品從管壁流下去，同時(shí)要避免將管底部捅破。

鹽水溫度以40℃左右為宜，不能過(guò)熱，會(huì)將部分微生物燙死；也不能溫度太低，不能將樣品溶解*。

進(jìn)行稀釋時(shí)，要搖勻，保證溶液的均一性。

傾倒平皿時(shí)，要注意培養(yǎng)基瓶口不要接觸到平皿；傾倒的培養(yǎng)基要適量，不可以太少，在培養(yǎng)過(guò)程中易干掉，微生物亦死亡，以 15mL 左右為宜。

做大腸菌群樣時(shí)，要提前將乳糖膽鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)管按需要量備好，放入超凈臺(tái)對(duì)外表面進(jìn)行紫外線滅菌。

接二步時(shí)，要注意先將接種針（環(huán)）進(jìn)行冷卻，避免出現(xiàn)接不上菌落的情況，導(dǎo)致無(wú)法判斷、確認(rèn)。

檢測(cè)完畢，及時(shí)放入相應(yīng)培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，并清理清潔超凈臺(tái)。

五、微生物的培養(yǎng)

1.在培養(yǎng)過(guò)程中，要隨時(shí)監(jiān)控培養(yǎng)箱溫度，保證其在適宜的溫度進(jìn)行培養(yǎng)。

2.要按照《微生物檢驗(yàn)規(guī)范》要求及時(shí)觀察結(jié)果，出現(xiàn)異常，要及時(shí)分析原因進(jìn)行反饋。

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