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與核酸純化相比,蛋白純化可是一項相當艱苦的工作。純化時間長,操作步驟繁瑣。有時,在實驗室呆了一整天,換來的卻是讓人傷心的結果,蛋白得率低,純度差。這時你也許會想,如果純化蛋白像提質(zhì)粒一樣簡單就好了。
如今,你的夢想成真了。Clontech(Takara旗下)推出了新一代的蛋白純化試劑盒 – His-Tagged Purification Miniprep Kit。真的就像質(zhì)粒純化一樣,加樣、結合、清洗、溶出,幾次離心,5分鐘即可純化出100 μg His-tag融合蛋白。
這個系統(tǒng)在純化柱中安裝了尼龍膜,能夠在室溫下快速操作,無需等待,并且與哺乳動物和細菌的細胞兼容。細胞裂解液中通常有各種添加劑存在,比如β-巰基乙醇、EDTA、DTT、甘油等,沒關系,這個系統(tǒng)也能穩(wěn)定發(fā)揮高性能。
純化柱中的尼龍膜經(jīng)過改良,膜的表面積大,能產(chǎn)生高純度、濃縮的蛋白質(zhì)。通過這種技術,尼龍膜的蛋白結合能力可媲美樹脂,甚至更強。與樹脂相比,膜的滴下速度快,可在短時間內(nèi)進行純化。柱床體積小,可進行少量、高濃度的溶出。
從2-5 ml培養(yǎng)液中制備出200-800 μl細胞裂解液,加入純化柱后經(jīng)過平衡、結合、洗滌和溶出,5分鐘即可完成純化,zui多獲得100 μg His-tag融合蛋白。濃度大約在0.3-1 mg/ml。操作流程簡便,時間短,可降低蛋白質(zhì)降解或活性損失的風險,讓下游應用的成功率更高。
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