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一、ATP酶存在于組織細(xì)胞及細(xì)胞器的膜上,是生物膜上的一種蛋白酶,它在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞放免具有重要的作用,機(jī)體在缺氧及一些疾病狀態(tài)下,此酶活力發(fā)生一系列改變,另外有些遺傳疾病也與此酶活力有關(guān)。
二、測(cè)定原理:
ATP酶可分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量可判斷ATP酶活力的高低。
三、試劑組成和配置:
組分 | 50T/25樣 | 100T/50樣 | 保存 | |
試劑一 | 液體 | 13ml X 1瓶 | 13ml X 2瓶 | 4℃保存6個(gè)月 |
試劑二 | 液體 | 4ml X 1瓶 | 4ml X 2瓶 | 4℃保存6個(gè)月 |
試劑三 | 粉劑 | 粉劑X 4支 | 粉劑X 8支 | -20℃保存6個(gè)月 |
試劑三的配制:用時(shí)每支試劑三粉劑加雙蒸餾水1ml,充分溶解。(用不完-20℃以下可保存一周。) | ||||
試劑四 | 液體 | 5ml X 1瓶 | 5ml X 2瓶 | 4℃保存6個(gè)月 |
試劑五 | 甲液 | 7ml X 4瓶 | 7ml X 8瓶 | 4℃保存6個(gè)月 |
乙液 | 6ml X 1瓶 | 6ml X8瓶 | 4 4℃避光保存6個(gè)月 | |
注:試劑五乙液在冬天或4℃長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)凝膠狀物質(zhì),37℃溶解不了,可將其60℃左右水浴10分鐘即可*溶解;甲液、乙液應(yīng)防止磷污染。 | ||||
試劑六 | 液體 | 50ml X 1瓶 | 50ml X 2瓶 | 室溫保存6個(gè)月 |
試劑七 | 10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 | 5ml X 1瓶 | 5ml X 1瓶 | 4℃保存6個(gè)月 |
試劑十 | 貯備液 | 0.1ml X 3支 | 0.1ml X6 支 | 4℃保存6個(gè)月 |
稀釋液 | 0.9ml X 3支 | 0.9ml X6支 | 4℃保存6個(gè)月 | |
試劑十的配制:取一支試劑十稀釋液加入一支試劑十貯備液中,用不完的4℃保存。 | ||||
0.1umol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液的配制:用時(shí)將10mmol/L磷貯備液100倍稀釋,即取0.1ml加雙蒸水至10ml | ||||
0.02umol/ml磷標(biāo)準(zhǔn)液的配制:用時(shí)將0.1umol/ml磷標(biāo)準(zhǔn)液用雙蒸水5倍稀釋,即取0.1umol/ml磷標(biāo)準(zhǔn)液1ml加雙蒸水4ml | ||||
基質(zhì)液的配制: 按試劑一:試劑二:試劑三=260:80:80比例混合。需多少配多少,現(xiàn)用現(xiàn)配 | ||||
顯色劑的配制:用時(shí)取一瓶試劑五甲液加入一瓶已預(yù)溫好試劑五乙液中,充分混勻,需提前0.5小時(shí)配制,2--8℃條件下至少可保存5天,配好的顯色劑的量夠做13個(gè)管子(如果你的樣本量很少,所需的顯色劑的量較少,那么你可以按試劑五的甲液:乙液=7:6的比例自行配制顯色劑,需多少配多少(按比例配制顯色劑時(shí)要防止磷污染,用吸嘴)。 |
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