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1、樣本處理:
①、血清(漿):直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。
②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,2500 轉/分,離心 10 分鐘,取上清測定。
[注]:一般建議細胞密度在 100 萬個/ml 以上。
③、組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍體積的勻漿介質(zhì),冰 水浴條件下機械勻漿,2500 轉/分,離心 10 分鐘,取上清液待測。
[注]:1、如組織樣本不存在高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。 2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用無水乙醇進行提取。
④、細胞樣本:
A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出,1000 轉/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;用 等滲緩沖液(推薦 0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗 1~2 次,同樣 1000 轉/分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;
B、細胞破碎:加入 0.2~0.3ml 的勻漿介質(zhì)(推薦 0.1mol/L pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水) 進行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5 秒/次,間隔 30 秒,重復 3~5 次)或手動勻漿, 制備好的勻漿液不離心待測。也可采用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,1~2%,裂解 30~40 分鐘), 裂解好的液體不離心直接測定。
[注]:一般建議細胞密度在 100 萬個/ml 以上。破碎好的液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎*
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