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過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒的檢測(cè)原理以及自備儀器

來(lái)源:上海百蕊生物科技有限公司   2015年07月01日 16:27  

上海百蕊生物代理銷售過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎。

過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒測(cè)定原理H2O在 240nm 下有特征吸收峰,CA能夠分解 H2O2,使反應(yīng)溶液 240nm 下的吸光度隨反 應(yīng)時(shí)間而下降,根據(jù)吸光度的變化率可計(jì)算出 CAT 活性。

需自備的儀器和用品:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、 研缽、冰和蒸餾水

試劑組成和配制:提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存; 試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存; 試劑二:液體 125μL×1 瓶,4℃保存。

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備

收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液, 超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置 冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 240nm,蒸餾水調(diào)零。

2、CAT 檢測(cè)工作液的配制:用時(shí)在試劑二中加入 25mL 試劑一,充分混勻,作為工作液。

3、測(cè)定前將 CAT 檢測(cè)工作液在 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上。

4、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 190μL 工作液,立即混勻并計(jì)時(shí),記錄

240nm 下初始吸光值 A11min 后的吸光值 A2。計(jì)算 ΔAA1-A2。


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