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核酸和蛋白質(zhì)是生物大分子,為生命的zui基本物質(zhì)之一。他們在生物的生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖、遺傳和變異等生命活動(dòng)中占有極其重要的地位。隨著分子生物學(xué)的廣泛應(yīng)用,核酸定量已經(jīng)成為一種常規(guī)化的實(shí)驗(yàn)手段。
目前核酸蛋白定量的方法以吸光度測(cè)定為主:其原理是測(cè)量OD(260)和OD(280)的吸收值——核酸的zui高吸收峰為260nm,蛋白質(zhì)的zui高吸收峰為280nm。定量不同類型的核酸,事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù), 1OD 的吸光值分別相當(dāng)于50μg / mL的dsDNA,37μg / mL的ssDNA, 40μg/mL的RNA,30μg/mL的寡核苷酸。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。核酸定量中A260 / A280的比值代表樣品的純度,純凈的樣品比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果小于1.8或者2.0,說(shuō)明存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。
通常實(shí)驗(yàn)室測(cè)量樣品吸光度的方法:用比色杯測(cè)定的分光光度計(jì)及超微量分光光度計(jì)等。BioTek公司推出了快速高通量的超微量核酸蛋白定量新方法:應(yīng)用Take3超微量檢測(cè)板。Take3 使用靈活,可以用于全光譜的吸收光讀數(shù),廣泛覆蓋了吸收光檢測(cè)的各項(xiàng)應(yīng)用。配合酶標(biāo)儀使用一次可以同時(shí)檢測(cè)16個(gè)或48個(gè)體積為2μL的微量樣品,而無(wú)需稀釋。并且利用Biotek光程校準(zhǔn)的技術(shù),保證了優(yōu)異的準(zhǔn)確性和性。
對(duì)比傳統(tǒng)比色杯方法:Take3檢測(cè)板節(jié)約了樣品的浪費(fèi),上樣量?jī)H為2ul,對(duì)于檢測(cè)珍貴樣品的用戶特別有用,并且操作方便簡(jiǎn)單無(wú)需稀釋操作。對(duì)比超微量分光光度計(jì):高通量快速檢測(cè)是Take3的zui大特點(diǎn)。并且Take3檢測(cè)板光譜應(yīng)用廣泛:200~999nm,1nm步進(jìn)。對(duì)于需要進(jìn)行高通量快速微量核酸蛋白樣品定量的用戶來(lái)說(shuō),Take3的應(yīng)用是個(gè)簡(jiǎn)便的核酸蛋白定量檢測(cè)新方法。BioTek酶標(biāo)儀配上一塊小小的Take3,就能變?yōu)橐惶准喾N檢測(cè)任務(wù)于一身的工作平臺(tái)。
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