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一． 污染的防止

       進(jìn)行PCR操作時(shí)，操作人員應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格遵守一些操作規(guī)程，zui大程度地下降也許呈現(xiàn)的PCR污染或根絕污染的呈現(xiàn)。

      （一）區(qū)分操作區(qū)：當(dāng)前，一般PCR尚不能做到單人單管，乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱完成*閉管操作，但無論是不是能夠到達(dá)單人單管，均要求試驗(yàn)操作在三個(gè)不一樣的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，PCR的前處理和后處理要在不一樣的阻隔區(qū)內(nèi)進(jìn)行：

1. 標(biāo)本處理區(qū)，包含擴(kuò)增摸板的制備；

2. PCR擴(kuò)增區(qū)，包含反響液的制造和PCR擴(kuò)增；

3. 產(chǎn)品剖析區(qū)，凝膠電泳剖析，產(chǎn)品攝影及重組克隆的制備。

各作業(yè)區(qū)要有必定的阻隔，操作器件，要有必定的方向性。如：標(biāo)本制備→PCR擴(kuò)增→產(chǎn)品剖析→產(chǎn)品處理。

牢記：產(chǎn)品剖析區(qū)的產(chǎn)品及器件不要拿到其他兩個(gè)作業(yè)區(qū)。

      （二）分裝試劑：PCR擴(kuò)增所需求的試劑均應(yīng)在裝有紫外燈的超凈作業(yè)臺(tái)或負(fù)壓作業(yè)臺(tái)制造和分裝。一切的加樣器和吸頭需固定放于其間，不能用來吸取擴(kuò)增后的DNA和其他來源的DNA：

1． PCR用水應(yīng)為高壓的雙蒸水；

2． 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴(kuò)增產(chǎn)品區(qū)制造；

3． 引物和dNTP應(yīng)分裝貯存，分裝時(shí)應(yīng)標(biāo)明時(shí)刻，以備發(fā)作污染時(shí)查找緣由。

      (三) 試驗(yàn)操作留意事項(xiàng) 盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大多數(shù)是假陽性反響的緣由，樣品間的穿插污染也是緣由之一。因而，不只要在進(jìn)行擴(kuò)增反響是慎重認(rèn)真，在樣品的搜集、乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱抽提和擴(kuò)增的一切環(huán)節(jié)都應(yīng)當(dāng)留意：

1. 戴一次性手套，若不當(dāng)心濺上反響液，當(dāng)即更換手套；

2. 運(yùn)用一次性吸頭，禁止與PCR產(chǎn)品剖析室的吸頭混用，吸頭不要長時(shí)刻露出于空氣中，防止氣溶膠的污染；

3. 防止反響液飛濺，翻開反響管時(shí)為防止此種情況，開蓋前稍離心搜集液體于管底。若不當(dāng)心濺到手套或桌面上，應(yīng)馬上更換手套并用稀酸擦洗桌面；

4. 操作多份樣品時(shí)，制備反響混合液，先將dNTP、乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即能夠削減操作，防止污染，又能夠增加反響的度；

5. zui終參加反響模板，參加后蓋緊反響管；

6. 操作時(shí)建立陰陽性對照和空白對照，即可驗(yàn)證PCR反響的可靠性，又能夠幫忙判別擴(kuò)增體系的可信性；

7. 盡也許用可更換或可高壓處理的加樣器，因?yàn)榧訕悠鱶ui簡單受產(chǎn)品氣溶膠或標(biāo)本DNA的污染，*運(yùn)用可更換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特別的加樣器，乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱至少PCR操作過程中加樣器應(yīng)當(dāng)，不能穿插運(yùn)用，尤其是PCR產(chǎn)品剖析所用加樣器不能拿到其它兩個(gè)區(qū)；

8. 重復(fù)試驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果，慎下結(jié)論。

      （四）選擇質(zhì)量好的乾蕓GENIN PCRroom-1st操作臺(tái)PCR操作箱，以防止樣本外溢及外來核酸的進(jìn)入，翻開離心管前應(yīng)先離心，將管壁及管蓋上的液體甩至管底部。開管動(dòng)作要輕，以防管內(nèi)液體濺起。

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