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根據(jù)上海勁馬技術(shù)部解析指導(dǎo)，elisa試劑盒解析了細(xì)胞爬片的保存固定方法，為實(shí)驗(yàn)者提供有利的實(shí)驗(yàn)參考數(shù)據(jù)，

elisa試劑盒提供：*的固定及保存方法：

（1）中性緩沖福爾馬林（不必調(diào)pH）：

福爾馬林（40%甲醛，用時(shí)加入過(guò)量堿式MgCO₃中和） 10.0 ml

Na₂HPO₄.12H₂O 1.9653 g

NaH₂PO₄.2H₂O 0.5460 g

加0.85 %NaCl溶液溶解，定容至100 ml。

（2）細(xì)胞固定：待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層時(shí)，用鑷子取出蓋玻片，迅速于37℃PBS中漂洗2次，每次3-5秒，以清除血清。

（3）將蓋玻片投入中性緩沖福爾馬林溶液中室溫固定30 min。

（4）用鑷子取出蓋玻片，PBS漂洗2次，每次3-5秒，晾干保存于-20℃?zhèn)溆?。可長(zhǎng)期保存，做實(shí)驗(yàn)時(shí)，取出片子，入PBS濕潤(rùn)后即可進(jìn)行你的實(shí)驗(yàn)。

可以用于做免疫細(xì)胞化學(xué)（H.E.)或免疫熒光。

 細(xì)胞爬片固定以后要放在-20度的冰箱，1個(gè)月內(nèi)可以用。

過(guò)氧化氫處理這一步，用三蒸水稀釋商品濃度為30%的過(guò)氧化氫，然后室溫下玻片放在其中浸泡10 min，是不是過(guò)氧化氫導(dǎo)致細(xì)胞嚴(yán)重脫片？

爬片應(yīng)該用甲醇/雙氧水，你的細(xì)胞極可能是過(guò)氧化氫導(dǎo)致嚴(yán)重脫片。

elisa試劑盒提供 本人比較喜歡用4%得多聚甲醛，20分鐘很好用的。保存的時(shí)候注意片子晾干，不要擠壓，防止粘片和碎裂。

 細(xì)胞爬片固定好以后，如果要保存，我們的做法是倒掉固定液，PBS漂洗后干片保存在4度，zui長(zhǎng)半年沒(méi)問(wèn)題。

elisa試劑盒提供（1）用新鮮配制的預(yù)冷的4%多聚甲醛緩沖液室溫固定15 min，PBS (0.01 mol/l，pH7.4)洗滌3遍后是否就可以進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色了？

（2）爬片PBS (0.01 mol/l，pH7.4)洗滌3遍后是否能保存，怎樣保存？

答：（1）洗過(guò)就可以做免疫組化了。

（2）固定過(guò)后自然干燥，不要洗，-20度保存。做之前再洗。

elisa試劑盒提供 細(xì)胞固定用丙酮或酒精，不要用4%多聚甲醛，以免抗原交聯(lián)，這樣組化時(shí)不用再抗原修復(fù)。細(xì)胞固定后可室溫保存在丙酮中，不使之干燥。

1.  如果是檢測(cè)膜上的物質(zhì),好象不能用酒精。

2.  適當(dāng)密度后取出固定(丙酮-20固定10～20 min)，再進(jìn)行免疫染色。

3.  一批細(xì)胞爬片，如果細(xì)胞爬片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分鐘，然后放-20度，沒(méi)有問(wèn)題。如果細(xì)胞爬片是在24孔板或6孔板里進(jìn)行，冷丙酮會(huì)腐蝕板子，4%多聚甲醛。

4.  細(xì)胞爬片用純丙酮固定10分鐘，取出干燥后用錫紙包裹，-70度保存。

5.  4%多聚甲醛固定后PBS水洗，自然干燥后用錫紙包裹，-20度凍存不超過(guò)1月。

6.  如果細(xì)胞貼壁困難，可將片子先用純血清掛一層，涼干后再養(yǎng)細(xì)胞。

7.  可以買NUNC公司的細(xì)胞培養(yǎng)用蓋玻片，商品名Thermanox Coverslips。高分子材料，耐高溫滅菌，經(jīng)過(guò)特殊表面處理，細(xì)胞容易貼附。可以用剪刀任意裁剪，使用效果好。

上海勁馬有現(xiàn)貨，不用國(guó)外定貨。我使用后，覺(jué)得效果比玻璃蓋玻片效果好很多。

8.  我們通常是把細(xì)胞玻片固定好后，用PBS沖洗干凈，然后用酒精脫水（80%，90%，，酒精各一次，每次10分鐘左右），然后放在烘箱里烘干，這是就相當(dāng)于石蠟切片了，可以保存一定的時(shí)間。

這個(gè)方法我們?cè)囘^(guò)的，保持一段時(shí)間后做，效果還是可以的。