Fluo-4 AM是常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃，分子量為1096.95。
Fluo-4 AM在Fluo-3 AM的基礎(chǔ)上改進而成，其特點是加載更快并且在相同條件下熒光更加明亮。Fluo-4 AM將Fluo-3 AM結(jié)構(gòu)中的氯原子替換成了氟原子，導(dǎo)致它的最大激發(fā)波長會向短波長處偏離12nm左右。這個波長更接近于氬激光器的波長488nm，所以用氬激光器激發(fā)時，F(xiàn)luo-4的熒光強度會比Fluo-3強一倍。由于Fluo-4與鈣離子的親和力和Fluo-3相近，所以使用上和Fluo-3也基本相同，可以使用激光共聚焦顯微鏡、熒光酶標儀等熒光檢測儀器來測定細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的結(jié)構(gòu)式參考圖1。

圖1. Fluo-4 AM和Fluo-3 AM的結(jié)構(gòu)式。
Fluo-4 AM是Fluo-4的乙酰甲酯衍生物，是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-4 AM的熒光非常弱，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。Fluo-4 AM進入細胞后可以被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-4，從而被滯留在細胞內(nèi)。Fluo-4可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強的熒光，最大激發(fā)波長為494nm，最大發(fā)射波長為516nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右，發(fā)射波長為512-520nm。Fluo-4的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考圖2。

圖2. Fluo-4的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜
用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時，F(xiàn)luo-4 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-4 AM的適當溶液和細胞一起在20-37℃孵育10-60分鐘進行熒光探針裝載，隨后適當洗滌，洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-4 AM在細胞內(nèi)充分轉(zhuǎn)變成Fluo-4。
本Fluo-4 AM(鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO (anhydrous DMSO)中的儲存母液，濃度為2mM。
包裝清單：

保存條件：
-20℃避光保存，6個月有效。
注意事項：
Fluo-4 AM遇水極易分解，建議第一次使用時，母液分裝并密封保存，同時注意保持干燥。
Fluo-4 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi)，可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。
探針的工作濃度、細胞量、孵育溫度和時間等需要根據(jù)不同實驗預(yù)先摸索。
熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。