碧云天 BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶，即BeyoRT™ III M-MLV reverse transcriptase，是一種經(jīng)過改造和優(yōu)化的快速高效(短至10min完成反轉(zhuǎn)錄)、熱穩(wěn)定(高達55℃)、高精確度、產(chǎn)物超長(長達12kb)的反轉(zhuǎn)錄酶，具有正常的依賴于RNA或DNA模板的DNA聚合酶活性，能夠以RNA或DNA為模板，在引物存在的情況下進行互補DNA鏈的合成，即可以進行cDNA(complementary DNA)的第一鏈合成。同時本反轉(zhuǎn)錄酶保留了RNase H活性，能選擇性剪切RNA和DNA雜合雙鏈中的RNA，有利于后續(xù)cDNA第二鏈的合成。
本產(chǎn)品是常用的優(yōu)質(zhì)反轉(zhuǎn)錄酶之一，廣泛用于獲得總RNA或mRNA后cDNA第一條鏈的合成，后續(xù)可以用于PCR、real-time PCR也稱定量PCR(quantitative PCR, qPCR)、cDNA的第二鏈合成以及cDNA文庫的構(gòu)建，尤其是逆轉(zhuǎn)錄所得目的基因的克隆等。BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶還可以通過反轉(zhuǎn)錄用于DNA探針的熒光或同位素標記等，也可以通過引物延伸(primer extension)來分析和研究RNA。
M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)，也稱MMLV或M-MuLV；反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)也稱逆轉(zhuǎn)錄酶或RT酶。
本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄快速高效，普通反轉(zhuǎn)錄僅需10min。實測小于3kb的片段，42℃反轉(zhuǎn)錄10min即可完成，與反轉(zhuǎn)錄60min相比無顯著差別。大于3kb的片段，特別是大于6kb的片段，推薦反轉(zhuǎn)錄60min，以獲得最佳的反轉(zhuǎn)錄效果。
本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物長度超長。本產(chǎn)品經(jīng)測試可以輕松完成長度為8 kb以下基因的反轉(zhuǎn)錄(參考圖1)，反轉(zhuǎn)錄的最大長度可以達到12 kb。

圖1. 使用BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄總RNA后，對于不同長度的cDNA進行PCR擴增后的電泳效果圖。圖中可見0.2-12kb的cDNA可以非常高效地被反轉(zhuǎn)錄。

本產(chǎn)品熱穩(wěn)定性好，反轉(zhuǎn)錄效率高。本產(chǎn)品最適反應(yīng)溫度為42℃，當溫度達到50℃時仍具有很高活性，對于長度較短的cDNA反轉(zhuǎn)錄，溫度達到55℃時也可獲得較高產(chǎn)量的cDNA。高溫反轉(zhuǎn)錄對于高GC含量RNA的反轉(zhuǎn)錄，能有效減少二級結(jié)構(gòu)，提升反轉(zhuǎn)錄效率。本產(chǎn)品反轉(zhuǎn)錄速度快，6kb以下的cDNA反轉(zhuǎn)錄只需0.5h即可完成，3kb以下的cDNA反轉(zhuǎn)錄10min即可完成(參考圖2)。

圖2. BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶在不同溫度反應(yīng)不同時間的反轉(zhuǎn)錄效果。從HEK293T細胞抽提獲得的總RNA 2µg，在20μl反轉(zhuǎn)錄體系中按照圖中所示溫度、時間進行反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄后取1μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行目的基因(2.6kb的YWHAZ基因和6.0kb的ADAR1基因)的PCR擴增和電泳。

本產(chǎn)品性價比高。BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶是一種大腸桿菌重組高表達的反轉(zhuǎn)錄酶，由于其表達量非常高，大大提高了本產(chǎn)品的性價比。本反轉(zhuǎn)錄酶為表達含有從Moloney Murine Leukemia Virus reverse transcriptase基因克隆的pol基因，并進行了多個突變優(yōu)化以提高其熱穩(wěn)定性、反轉(zhuǎn)錄效率、反轉(zhuǎn)錄長度和表達量。
酶活性定義：One unit of the enzyme incorporates 1 nmol of dTTP into acid-precipitable material in 10 min at 37℃ using poly(A)•oligo(dT)_12-18 as template-primer。反應(yīng)體系為 50 mM Tris-HCl(pH 8.3), 75 mM KCl, 3 mM MgCl₂, 10 mM DTT, 0.5mM [³H]-dTTP and 0.4 mM polyA•oligo(dT)_12-18。
純度：不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以滿足常規(guī)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈等的需要。
酶儲存溶液：20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.01%(v/v)
NP-40 and 50%(v/v) glycerol。
失活或抑制：80℃孵育10分鐘可以導(dǎo)致BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶失活；EDTA、EGTA等螯合劑、無機磷酸鹽或焦磷酸鹽以及聚氨(polyamine)對BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶有抑制作用。
本產(chǎn)品中M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶的濃度為200U/µl，用于體積為20μl的反轉(zhuǎn)錄體系時，本試劑盒的不同包裝足夠分別進行50次、250次和1000次反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項： 
對于GC含量比較高的RNA的反轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)品的使用說明中給予了特別說明，請予以關(guān)注。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

碧云天 BeyoRT™ III M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶