流式細胞術(shù)是一種在液流系統(tǒng)中，快速測定單個細胞或細胞器的生物學性質(zhì)，并把特定的細胞或細胞器從群體中加以分類收集的技術(shù)。在細胞生物學、細胞凋亡研究和免疫學方面起著非常重要的作用。隨著流式細胞術(shù)在不斷發(fā)展，流式抗體及熒光標記產(chǎn)品的種類、數(shù)量也在不斷增多，加上多色分析實驗方案需求的增長，逐漸產(chǎn)生了抗體難選擇、熒光難搭配等問題。那么如何選擇合適的流式抗體呢？

1、抗體的選擇

流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實驗。
（1）確定所需檢測的指標，目的細胞的特異性表面標記或胞內(nèi)標記；
（2）根據(jù)檢測樣本的種屬選擇抗體，流式抗體基本無法進行種屬交叉反應(yīng)；
（3）根據(jù)抗體的說明，明確是否可以用于流式實驗。

2、確定儀器的參數(shù)配置

激光器：不同的流式細胞儀激光器不同，常見的有405nm，488nm和635nm，需要根據(jù)具體的儀器進行確定。
濾光片：檢測通道的多少，決定最多可以同時檢測幾個指標。熒光素的發(fā)射波長與濾光片有關(guān)，所選擇熒光素要在儀器的可檢測范圍內(nèi)。
儀器：相同的熒光在不同的儀器上檢測通道可能不同，需要參照儀器的說明。

3、流式熒光標記的選擇

如果實驗中檢測單一指標：不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。用戶需根據(jù)檢測的目標蛋白進行具體選擇。
如果同時檢測多個指標：確認流式細胞儀能檢測多少個通道：流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。

4、同型對照的選擇

流式細胞實驗和其他抗體相關(guān)實驗有點不同的就是需要選擇同型對照。同型對照，是用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細胞表面而產(chǎn)生的背景染色，相當于實驗的陰性對照。同型對照選擇與標記抗體同種屬來源，同亞型，同熒光標記的抗體。比如：抗人的CD3的PE標記的抗體，小鼠的IgG2a。同型對照選擇PE標記的小鼠的IgG2a。
有時候同型對照的表達會比抗體的表達高，首先檢查同型對照的抗體是否加錯類型、劑量等。其次，因為有些標志在細胞的表面或者胞內(nèi)表達不高，而跟其類似的抗原非常多，那么同型對照非特異性的結(jié)合會超過抗體的特異性，所以會造成這種現(xiàn)象。這個時候推薦使用其他陰性對照，如空白對照等。

以上就是有關(guān)于如何選擇合適的流式抗體問題的全部解答，如果你想了解更多請咨詢百奧創(chuàng)新客服哦~

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如何選擇合適的流式抗體呢？

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