在蛋白表達系統(tǒng)的相關研究中,從頭合成蛋白質并不是一個可行的選擇。因此需要借助活細胞或細胞器用作生產和構建蛋白質的工廠。那么你知道該如何選擇蛋白表達系統(tǒng)嗎?讓我們一起來看看吧!
目前,較為主流的表達宿主有大腸桿菌(E.coli)、畢赤酵母(P.pastoris)、昆蟲-桿狀病毒(Bac-to-Bac系統(tǒng))以及哺乳動物細胞系(CHO、HEK293)等。
一、細菌
優(yōu)點:
1. 遺傳背景清楚;
2. 繁殖快、成本低、抗污染能力強;
3. 表達量高、表達產物分離純化相對簡單、穩(wěn)定性好;4. 商品化的載體和菌株種類非常齊全、適用范圍廣等。
缺點:
1. 沒有真核轉錄后加工的功能,沒有翻譯后修飾;
2. 表達的蛋白質經常是不溶的,容易形成包涵體;
3. 有一些真核蛋白的產量和活性較低;
4. 難以表達大分子哺乳動物蛋白質;
5. 可能會產生一些致熱源(內毒素)
二、酵母
優(yōu)點:
1. 結合了真核和原核的優(yōu)點,可生產翻譯后修飾的分泌蛋白和胞內蛋白;
2. 經濟高效,部分真核翻譯后修飾,如糖基化,磷酸基化。
缺點:
1. 可能形成不正確的蛋白糖基化;
2. 培養(yǎng)上清多糖濃度高不利于純化
三、哺乳動物穩(wěn)定表達系統(tǒng)
優(yōu)點:
1. 蛋白活性:翻譯后再加工修飾折疊的功能產生的外源蛋白質,更接近于蛋白質的天然狀態(tài)。
2.正確的高級結構(如糖基化)。
3.在蛋白的起始信號、加工、分泌、糖基化方面具有優(yōu)勢,適合表達完整的大分子蛋白。
缺點:
培養(yǎng)基成本高,培養(yǎng)周期長,至少一個月以上,培養(yǎng)較困難,表達量較低。構成復雜、操作技術要求高、表達產量不大、產率低
四、哺乳動物瞬時表達系統(tǒng)
優(yōu)點:
1. 適度快速表達
2. 很好表達膜蛋白和分泌蛋白
3. 所有蛋白都能進行折疊和最真實的翻譯后修飾
缺點:
1. 比較貴
2. 胞內蛋白產量低
總之,各種表達系統(tǒng)各有優(yōu)缺點,因此,選擇表達系統(tǒng)時,應充分考慮各種因素更多有關蛋白表達系統(tǒng)的選擇問題,請聯(lián)系北京百奧創(chuàng)新科技有限公司:
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