當(dāng)前位置:北京百奧創(chuàng)新科技有限公司>>技術(shù)文章>>支原體檢測方法有哪些?
我們在進行細(xì)胞培養(yǎng)實驗過程中易受到較多因素影響,導(dǎo)致支原體污染,對此就要對其進行支原體檢測,排除被污染的可能,就需要借助相關(guān)的檢測技術(shù)進行支原體檢測,那么支原體檢測方法有哪些?常用的是直接培養(yǎng)法、DNA熒光染色法,酶聯(lián)免疫吸附試驗,PCR檢測法等方法進行檢測。
直接培養(yǎng)法是檢測支原體的標(biāo)準(zhǔn)方法。是把樣品接種到支原體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng),并通過觀察液體培養(yǎng)基的顏色變化或是固體培養(yǎng)基上是否生長支原體菌落進行判斷,但培養(yǎng)法所需培養(yǎng)時間較長,要3~4周左右的時間,其次用培養(yǎng)法不能在同一培養(yǎng)基中檢測出所有的支原體類型,該方法常用于對種毒或疫苗成品的支原體檢測。
DNA熒光染色法,是把要檢測的樣品接種在指示細(xì)胞中進行培養(yǎng),然后用特異性熒光染料進行染色,再用熒光顯微鏡進行觀察,通過附著在細(xì)胞表面的支原體DNA的著色情況判斷該樣品是否被支原體污染。該方法用時短,可進行多個樣品檢測,還能檢測出使用直接培養(yǎng)法難以檢測出的支原體類型。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)DNA熒光染色法比直接培養(yǎng)法更為敏感、方便,耗時短、準(zhǔn)確穩(wěn)定。
酶聯(lián)免疫吸附試驗即ELISA檢測法,對診斷支原體是較方便和準(zhǔn)確的方法之一,常見的ELISA檢測法有間接法和抗原競爭法等,檢測支原體都有較好的特異性及敏感性,并且可以一次性進行多樣品檢測,并且成為檢測支原體的常規(guī)方法之一,一般是通過比色法得出相應(yīng)的結(jié)果進一步來判定是否有支原體污染的情況。
PCR方法是一種DNA復(fù)制的體外擴增方法,由于支原體生長緩慢對營養(yǎng)環(huán)境要求較高,對支原體直接培養(yǎng)法檢測還有一定局限性,而PCR檢測法相對于直接培養(yǎng)法更為快速、敏感。其中的巢式PCR檢測法是在普通PCR檢測方法上進行優(yōu)化改進的,通過巢式PCR引物擴增后存在的目的片段情況進行合理判斷,并可以對支原體類型進行準(zhǔn)確的分析及判斷,進一步對污染源進行判斷。
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