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RT-qPCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增結(jié)合起來(lái)，并對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析的技術(shù)。目前RT-qPCR應(yīng)用領(lǐng)域廣泛，在科研端可用于基因表達(dá)量分析、病原體檢測(cè)、RNA干擾驗(yàn)證，同時(shí)也是分子體外診斷的行業(yè)金標(biāo)準(zhǔn)，例如在臨床疾病診斷、動(dòng)物檢驗(yàn)檢疫、食品安全和科學(xué)研究等應(yīng)用場(chǎng)景均有涉及，肝炎、艾滋病、流感、登革熱、感染性腹瀉等的檢測(cè)、診斷和治療上發(fā)揮著重要作用。那么在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們?nèi)绾握_處理RT-qPCR實(shí)驗(yàn)樣本以提取到高質(zhì)量的RNA是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵，處理RT-qPCR實(shí)驗(yàn)樣本的注意事項(xiàng)有哪些？讓我們跟著小編一起來(lái)學(xué)習(xí)一下吧！
一、避免外源RNase影響
外源RNase是導(dǎo)致RNA降解的主要因素。采集和實(shí)驗(yàn)環(huán)境要盡可能整潔，使用的耗材需要用DEPC處理或購(gòu)買無(wú)酶耗材；同時(shí)實(shí)驗(yàn)人員操作迅速熟練，使降解時(shí)間縮短。
二、避免內(nèi)源RNase影響
某些富含RNA內(nèi)源酶的部位 (如脾臟、胸腺) 本身就容易降解，應(yīng)該在液氮條件下將組織碾碎，且勻漿時(shí)使用更多裂解液。
三、根據(jù)提取量分裝樣本
取樣前先明確一次提取的組織量，取樣后按照一次提取的量分管保存，避免二次分管和并管造成的污染和降解。
四、選擇高豐度組織部位
不同組織部位的RNA含量不同，實(shí)驗(yàn)中盡量選用高豐度的組織部位，如動(dòng)物樣本的肝臟、心臟的RNA含量可達(dá)2-4 μg/mg，植物樣本中的葉片、根莖為0.2-0.3 μg/mg。
以上就是處理RT-qPCR實(shí)驗(yàn)樣本的注意事項(xiàng)介紹，如果您有更多關(guān)于RT-qPCR實(shí)驗(yàn)的問(wèn)題，請(qǐng)與百奧創(chuàng)新客服聯(lián)系！
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