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其他類elisa定量檢測試劑盒檢測標準

時間:2017/8/14閱讀:165
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其他類elisa定量檢測試劑盒檢測標準
如果實驗過程中抗體間發(fā)生沖突或交叉反應,會影響到整個實驗的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應的一個因素?,F(xiàn)在購買源自動物的抗體越來越容易,仍需要確認一下是否會產(chǎn)生交叉反應。在用雙抗夾心法進行ELISA試劑盒檢測時,檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應。如果檢測用二抗與捕獲抗體結合,實驗特異性就會大打折扣。
通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。 如今檢測ELISA試劑盒有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進行選擇。一般ELISA試劑盒檢測的是酶促反應的可溶性產(chǎn)物,抗體上結合有相應的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應體系中添加有相應的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計進行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上,也可以結合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成"夾心復合物"。類同于沉淀反應中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,ELISA試劑盒此時反應后顯色的吸光值(位于抗原過剩帶上)與標準曲線(位于抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同,如按常法測讀,所得結果將低于實際的含量,這種現(xiàn)象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標準曲線到達高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的zui高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,ELISA試劑盒這也是用單抗作夾心法應注意的問。此外ELISA試劑盒的結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學發(fā)光或顯色法檢測等。
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