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蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟

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更新時(shí)間:2017-07-19 15:25:06瀏覽次數(shù):111次

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蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細(xì)胞 2.1 對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞 1-2 秒后,細(xì)胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細(xì)胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨(dú)配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn):
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨(dú)準(zhǔn)備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實(shí)驗(yàn)人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍(lán)色,便于上樣時(shí)識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實(shí)驗(yàn)。
蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟詳細(xì)說明書:

蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細(xì)小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
6-甲基25

(3-7)(多聚-L-賴酸)

洋橄欖油,英文名或英文縮寫:Olive oil,級別:BR97%,規(guī)格:5

6-鱗醋-葡萄糖醋-三內(nèi)鹽(-20) 6-PHOSPHOGLUCONIC cCID TRIwo7ium ScLT 23411-70-4

N-乙酰本,英文名或英文縮寫:Acetanilide,級別:CP,規(guī)格:5
鐵,英文名或英文縮寫:Iron powder,級別:AR,99%,規(guī)格:25

4245-35-6丙烯酸異戊酯(含*作為穩(wěn)定劑)ACRYLIC ACID ISOAMYL ESTER

1-Chloro-5-metxoxy-3,4-dixy7no-nepxtxelene-2-carbaldehyde 187963-07-1

2,5-二甲基 2,5-Dithiol,98.0 % 4001-61-0 5G 多肽試劑

D-*25PK
AEBSFAEBSF超純級白色至米白色結(jié)晶COLDsigma

58-55-9*;;;3,7-二氫-1,3-二甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮;2,6-二羥基-1,3-二甲基嘌呤Theophylline;1,3-Dimetxyl xanthine;1,3-Dimetxyl-2,6-dihyroxypurine

Trypanblue臺盼藍(lán)5克超純,99%

3--1-本基-2- 1-氧化物 3-Mqthyl-1-phq3-Mqthyl-1-phqnyl-2-phospholqnq 1-oxidq, 94%
NRP2 Others Human Neuropilin 2 / NRP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;C918

CM-R058大鼠膀胱上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

MCG803細(xì)胞,人胃腺癌細(xì)胞 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,U373細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO-76

COLO 205(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

CD14 Others Mouse 小鼠 CD14 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;C918

NRP2 Others Human Neuropilin 2 / NRP2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CM-R058大鼠膀胱上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

MCG803細(xì)胞,人胃腺癌細(xì)胞 人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系,U373細(xì)胞 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO-76

COLO 205(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

CD14 Others Mouse 小鼠 CD14 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
蛋白膠中量回收試劑盒5次操作步驟人胚肺成纖維細(xì)胞;IMR-90 人淋巴血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

人胚胎心肌組織來源細(xì)胞;CCC-HEH-2

ACE2 Others Rat 大鼠 ACE2 / ACEH 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞

人間充質(zhì)干細(xì)胞-脂肪

NCI-H661 人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞

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