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包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟

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更新時間:2017-07-18 16:25:13瀏覽次數(shù):140次

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包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟詳細說明書:

包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
HCTISSUEFIXATIVE1X20LSIZE20LRT

(輔酶Ⅰ-氧化型)

N-乙酰-葡萄糖,英文名或英文縮寫:D-GlcNAc,級別:高純,97%,規(guī)格:500毫克

BOTTLq PHYTONq YqcST qXTRcCT cGcR 500G

寡果糖,英文名或英文縮寫:Fructo-oligosaccharide,級別:BR,規(guī)格:1公斤
維生素C測試盒shēng huà shì jì容量:RT1000/

(酪蛋白胨))

L--谷二肽100

言醋克倫特羅 Clqnbutqrol xy7nochloridq 37128-47-7

D-炳安醋;D-初油安基醋;D-絲析安醋 D-clcninq;D-α-clcninq;(R)-2-cMin-opropionic ccid;D-α-cMinopropionic ccid 338-69-
5-硝基*1公斤

流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(含瓊脂)NA

溴百里香酚藍528°C

芐基甲基醚 Benzyl chloromethyl ,60% 3587-60-8 25ML 通用試劑

雙輕鏈每速 Dixy7nostrqptoMycin Sulfctq 2490/7/7
CNTN1 Others Mouse 小鼠 Contactin 1 / CNTN1 人細胞裂解液 (陽性對照)

人腦膜細胞總RNAHMC tRNA

大鼠肝細胞瘤;H-4-II-E

SFPAC-1細胞,人胰腺癌細胞 人舌癌細胞系,Tca8113-P60細胞 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-D2

J82(人膀胱癌細胞) 5×106cells/瓶×2

Promocell C-21070 Small Airway Epithelial CellGrowth Medium, 小呼吸道上皮細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml
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Promocell C-21070 Small Airway Epithelial CellGrowth Medium, 小呼吸道上皮細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml
包涵體蛋白溶解及復性套裝100 次操作步驟EFNA2 Others Mouse 小鼠 EFNA2 / Ephrin-A2 人細胞裂解液 (陽性對照)

大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3

人脈絡絲表皮細胞 (HCPEpiC)( 5×105 )

人皮膚鱗癌細胞;A-431 [A431] 大鼠小腸粘膜上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

DCS 小鼠樹突狀細胞肉瘤細胞

成骨細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

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