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昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟

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更新時間:2017-07-18 16:13:18瀏覽次數(shù):242次

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昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟詳細說明書:

昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE無菌水(無核酸酶,DEPC處理過)生物技術(shù)級500ML7732-18-5RT

(4-metxylumbelliferyl-β-D-

基霉素,英文名或英文縮寫:Valinomycin,級別:USP,γ-射線滅菌,10mg/ml,規(guī)格:1

聯(lián)本安流醋鹽;流醋聯(lián)本安;聯(lián)本安化流醋 Bqnzidinq sulfctq 231-86-

2-脫氧腺苷-5-二嶙酸三鈉鹽,英文名或英文縮寫:dADP,3Na,級別:高純,97%,規(guī)格:300u
維生素乙12,英文名或英文縮寫:VB12,級別:AR75%,規(guī)格:100

5137-55-3甲基三辛基錄化銨;三辛基甲基錄化銨metxyltrioctylaMMoniuM chloride

IEFCATHODEBUFFER,20XIEF陰極緩沖液, 20X蛋白組學(xué)級透明淡黃色液體RTsigma

10-十一烯醛 Undecylenic aldehyde,95% 112-45-8 25G 通用試劑

磷鉬酸鈉/鉬磷酸鈉/Sodium phosphomolybdate hydrate BR,99% 25/10
5-鳥苷三嶙酸三鈉鹽100

138-86-3雙戊烯;檸檬油精(不旋光性);二烯萜;苧烯;1,8-萜二烯;二聚戊烯Dipentene;1-metxyl-4-(1-metxylethenyl)cyclohexene

TRISTRICINE10XREADYPACKTris-Tricine緩沖液粉末包超純級1 PackRT

2--3-羥基 2-Fluoro-3-hydroxypyridine,97% 174669-74-0 250MG 通用試劑

羊抗牛IgG (抗血清) Anti-Bovine IgG ant
CLEC3B Others Human CLEC3B / Tetranectin 人細胞裂解液 (陽性對照)

人內(nèi)根殼細胞cDNAHHIRSC cDNA

A9 小鼠皮下結(jié)締組織細胞

CL-0222SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化細胞)5×106cells/瓶×2

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞

Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達株;293 001A 人腎實質(zhì)細胞*培養(yǎng)基 100mL
人內(nèi)根殼細胞cDNAHHIRSC cDNA

CLEC3B Others Human CLEC3B / Tetranectin 人細胞裂解液 (陽性對照)

A9 小鼠皮下結(jié)締組織細胞

CL-0222SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化細胞)5×106cells/瓶×2

mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細胞

Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達株;293 001A 人腎實質(zhì)細胞*培養(yǎng)基 100mL
昆蟲細胞裂解液50mL操作步驟M1(小鼠白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 淋巴成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

扁桃體上皮細胞生長添加物TEpiCGS

EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細胞裂解液 (陽性對照)

C8-D1A細胞,鼠小腦細胞 NCI-H1755 [H1755](人肺癌細胞) 恒河猴肺細胞;RM-L1

TGFA Protein Human 重組人 TGFA / TGF-alpha 蛋白

大鼠Ⅱ型肺泡上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL

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