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RIPA 裂解液 ( 弱 )100mL操作步驟

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更新時間:2017-07-18 14:22:31瀏覽次數(shù):137次

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RIPA 裂解液 ( 弱 )100mL操作步驟如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

RIPA 裂解液 ( )100mL操作步驟對于培養(yǎng)細胞樣品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
2. 裂解細胞 2.1 對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血 清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞 1-2 秒后,細胞就會被裂解。 2.2 對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分 裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔細胞加入 150 微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高 可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
RIPA 裂解液 ( )100mL操作步驟產(chǎn)品及特點:
SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)是目前電泳法變性分離蛋白質(zhì)的主要方法,但是單獨配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點:
1.
一站式,即開即用,用戶不需單獨準備各種成分,十分方便。
2. 安全,將實驗人員接觸粉末狀丙烯酰胺的可能降到低。
3. 靈活,分開提供的丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺便于配制各種比例和濃度的 SDS-PAGE,滿足分離各種大小不同的蛋白質(zhì)的要求。
4. 使用改良的濃縮膠緩沖液,由于其含有染料,制備的濃縮膠呈藍色,便于上樣時識別加樣孔。
5. 電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交等實驗。
RIPA 裂解液 ( )100mL操作步驟詳細說明書:

RIPA 裂解液 ( )100mL操作步驟對于組織樣品:
1. 把*切成細小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入 PMSF, 使 PMSF 的終濃度為 1mM。
3. 按照每 20 毫克組織加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的 PAGE、 Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈 vortex 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是 比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
ALIZARINREDS茜素紅S生物染料級100G130-22-3RT

(石臘油)(高純礦物油)

細胞血素C,英文名或英文縮寫:Cytochrome C,級別:BR,0.5u/mg,規(guī)格:100

本¤;安息油;凈本;動力本;純本;溶液本;困凈本 Bqnzol;Phqnyl hydridq;Cyclohqxctriqnq;Coclncphthc;Phqnq 71-43-

2-對基本磺酰嘧啶,英文名或英文縮寫:Sulfadi,級別:細胞培養(yǎng)級,95%,規(guī)格:25PK
我妻氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量:RT,避光200毫升

PH緩沖液 PH6.0(20)NA

L-天冬酸二甲酯鹽酸鹽100

基二茂鐵 Ferrocenylamine,96% 1273-82-1 100MG 通用試劑

輕化鋰 litxium hydridq 7280-67-8
5-*二嶙酸三鈉鹽50RT

(Bis-Acrylamide雙丙烯酰胺)

鄰羥甲基本酸內(nèi)酯,英文名或英文縮寫:Phthalide,級別:CP,98%,規(guī)格:100

十二水合流醋鐵銨 cmmonium fqrric sulfctq dodqcchydrctq 7783-83-7

黃遞酶,英文名或英文縮寫:Diaphorase,級別:BR,5000u/g,根霉,規(guī)格:100
KLK7 Others Mouse 小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 人細胞裂解液 (陽性對照)

人脈絡(luò)叢成纖維細胞cDNAHCPF cDNA

人前脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL

MC細胞,大鼠巨噬細胞 THP-1(人單核細胞) 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A

EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標簽)

BC-019(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤細胞;P388D1(IL-1)
人脈絡(luò)叢成纖維細胞cDNAHCPF cDNA

KLK7 Others Mouse 小鼠 KLK7 / Kallikrein 7 人細胞裂解液 (陽性對照)

人前脂肪細胞*培養(yǎng)基 100mL

MC細胞,大鼠巨噬細胞 THP-1(人單核細胞) 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A

EFNB1 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白 (His 標簽)

BC-019(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠淋巴瘤細胞;P388D1(IL-1)
RIPA 裂解液 ( )100mL操作步驟CEM/C1(人急性淋巴細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 人髓核細胞HNPC

主動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

TIMP1 Others Rat 大鼠 TIMP-1 / TIMP1 人細胞裂解液 (陽性對照)

HEL人紅白細胞白血病細胞 HEL human erythroleukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

FGF1 Protein Mouse 重組小鼠 / 大鼠 aFGF / FGF1 蛋白

大鼠腸微血管細胞*培養(yǎng)基 100mL

 

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