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EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL使用說明書

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更新時(shí)間:2017-07-18 13:11:26瀏覽次數(shù):236次

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EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL使用說明書是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞,適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株,用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg。

EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL使用說明書產(chǎn)品及特點(diǎn):
本產(chǎn)品是采用特殊工藝處理得到的大腸桿菌 DH10 Bac 感受態(tài)細(xì)胞,適用于昆蟲桿狀病毒 Bac-to-Bac 系統(tǒng)中同源重組的菌株,用于產(chǎn)生重組 Bacmid。使用 pUC19 質(zhì)粒檢測,本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 107CFU/μg DH10Bac 細(xì)胞包含親本 Bacmid bMON14272 和輔助質(zhì)粒 pMON7124。親本 Bacmid 包含一個(gè) mini-F 復(fù)制子、*抗性基因、att Tn7 位點(diǎn)和 lac Zα-互補(bǔ)因子。輔助質(zhì)粒包含 tns ABCD 區(qū)域,該區(qū)域提供了 mini-Tn7 從供體質(zhì)粒插入親本 Bacmid 靶位點(diǎn)所需要的轉(zhuǎn)座蛋白。供體如 pFastBac 系列質(zhì)粒(pFastBac1,pFastBacDual 等)含有 Tn7R Tn7L 同源重組臂,Tn7R Tn7L 之間包含*抗性基因、昆蟲病毒多角體基因啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信號(hào)。當(dāng)含有靶基因 pFastBac 的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到 DH10Bac 細(xì)胞后,發(fā)生重組后就可產(chǎn)生重組 Bacmid,提取純化重組 Bacmid 轉(zhuǎn)染昆蟲細(xì)胞 Sf9 Sf21 就可以包裝產(chǎn)生昆蟲病毒。此外,DH10Bac 細(xì)胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的產(chǎn)物可以實(shí)現(xiàn)β-半乳糖苷酶的α-互補(bǔ)現(xiàn)象,用于重組 bacmid 的藍(lán)白斑篩選。
EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL使用說明書規(guī)格及成分:

EGY48 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL使用說明書使用方法:
1. 制備含有如下抗生素的 LB 固體平板:50 μ g/mL Kanamycin,7 μ g/mL gentamicin10 μg/mL tetracycline,100 μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
2. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為 50-100 μL,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以 100 μL 感受態(tài)細(xì)胞為例。
3. 待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入 1-10 ng 重組質(zhì)粒,用移液器輕輕吹打混勻,冰浴 30 分鐘。
4. 42熱擊 90 秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置 2-3 分鐘。
5. 每個(gè)離心管中加入 900 μL 無菌的 SOC(不含抗生素),混勻后置于 37 搖床, 200rpm 振蕩培養(yǎng) 4 小時(shí)。
6. SOC 培養(yǎng)基進(jìn)行 10 倍梯度稀釋,如分成 3 個(gè)稀釋梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 100 μL 的各個(gè)梯度的培養(yǎng)物用于涂布。等平板中的液體*吸收后,倒置平板, 37培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。 8. 保留剩余的菌液保存于 4,視平板上菌落生長情況決定去留。
HA重組甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008 0.5mgphospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008) 磷酸化蛋白*激酶JAK-2抗原

STK10重組人 STK10 / LOK 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

KIAA1279 Protein Human 重組人 KIAA1279 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

CNTN3 Protein Human 重組人 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (708 Asp/Asn, Fc 標(biāo)簽)
HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

盤狀結(jié)構(gòu)域受體家族成員1(DDR1)重組蛋白 Recombinant Discoidin Domain Receptor Family, Member 1 (DDR1)

IL8重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 6-77) Protein

NPC2重組人 Niemann-Pick disease type C2 / NPC2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

HSP90AA1 Protein Human 重組人 HSP90AA1 / HSP90 蛋白
phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008 0.5mgphospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008) 磷酸化蛋白*激酶JAK-2抗原

KIAA1279 Protein Human 重組人 KIAA1279 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CNTN3 Protein Human 重組人 Contactin 3 / CNTN3 蛋白 (708 Asp/Asn, Fc 標(biāo)簽)

STK10重組人 STK10 / LOK 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
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人細(xì)胞角蛋白20(CK-20)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

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