當前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>探針標記及檢測產(chǎn)品>> 天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次規(guī)格
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更新時間:2017-07-17 12:47:21瀏覽次數(shù):171次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次規(guī)格步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次規(guī)格使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進行。
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次規(guī)格詳細說明書:
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次規(guī)格確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
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9(S)-HODE cholesteryl ester (50 ug) 9S-xy7noxy-10E,12Z-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 9(S)-HODE cholesteryl ester
RVX-208 (5 mg) 2-[4-(2-xy7noxyethoxy)-3,5-dimetxylpxenyl]-5,7-dimetxoxy-4(3H)-inoneazolinone
Annexin V-mFluor Violet 560偶聯(lián)物 Annexin V-mFluor Violet 560 conjugate
Palmiaidic Acid metxyl ester (50 mg) (9E)-hexadecenoic acid, metxyl ester; 9-trans-Hexadecenoic acid metxyl ester; Palmiaidic Acid metxyl ester
Dihomo-γ-Linolenic Acid (10 mg) 8Z,11Z,14Z-eicosatrienoic acid; DGLA; Dihomo-γ-Linolenic Acid
D-( EZSolution Ampicillin wo7ium, Sterile-Filtered
Growth Hormone Releasing Factor, GRF (1-29), amide, humanTyr-Ala-Asp-Ala-Ile-Phe-Thr-Asn-Ser-Tyr-Arg-Lys-Val-Leu-Gly-Gln-Leu-Ser-Ala-Arg-Lys-Leu-Leu-Gln-Asp-Ile-Met-Ser-Arg-NH2
α-Neo-Endorphin, porcineTyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Arg-Lys-Tyr-Pro-Lys
[Phe1376]-Fibronectin Fragment (1371-1382)Arg-Gln-Asp-Arg-Val-Phe-His-Ser-Arg-Asn-Ser-Ile
Biotin-Tyrosine Kinase Peptide 1, amideBiotin-Lys-Val-Glu-Lys-Ile-Gly-Glu-Gly-Thr-Tyr-Gly-Val-Val-Tyr-Lys-NH2
PACAP-38 (31-38) (human, chicken, mouse, ovine, porcine, rat)Tyr-Lys-Gln-Arg-Val-Lys-Asn-Lys-NH2
天凈沙非同位素探針雜交試劑盒5次規(guī)格糠醛FurfuralAR500mL
MD55-3.5透析袋(半周長55mm,直徑35mm,截留分子量3500Da) 500英尺(152.4米)0
211677-500gBacto Peptone 細菌蛋白胨500g
6XDNA上樣緩沖液1ml
*(潔霉素)1g
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