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即用型封堵液 (Nylon )50mL保存

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更新時間:2017-07-17 12:46:22瀏覽次數(shù):107次

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即用型封堵液 (Nylon )50mL保存一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。

即用型封堵液 (Nylon )50mL保存使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37
反應 30 分鐘。
4. 70加熱 510 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 7 M CH3COONH4pH 4.5)。如使用 CH3COONa 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL2.5 倍)的冷無水乙醇,-20放置 3060 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 58 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第 8 步之后進行。
即用型封堵液 (Nylon )50mL保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 5-12,一般情況下可以在 55進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
即用型封堵液 (Nylon )50mL保存步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠抑制素B(INH-B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)免疫試劑盒 Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK ELISA Kit

線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性測試盒 紫外分光光度法 25/24

RatlymphocytefactorELISA試劑盒大鼠淋巴細胞因子ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humangrowth-regulatedoncogeneγ/melanomagrowthstimulatingactivity,GROγ/MGSAELISA試劑盒人生長調(diào)節(jié)致癌基因γ/黑素瘤生激因子(GROγ/CXCL3/MGSA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanLeptospiraIgGLepIgGELISAKit人鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
大鼠組織蛋白去乙?;?/span>(HD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

人血清剝奪反應相關蛋白(SDPR)免疫試劑盒 Human SDPR ELISA Kit

人抗紅細胞抗體(RBC)ELISA試劑盒 ,英文名: RBC ELISA Kit

RatInterferonα,IFN-αELISA試劑盒大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

Humangastrin-reliasingpeptide,GRPELISA試劑盒人胃泌素釋放多肽(GRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

HumanInterleukin12IL-12/P70ELISAKit人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human orexin / orexin B (OX-B) ELISA Kit 人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒

Humanpancreatickininogenase,PKELISAKit 人*(PK)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanAnti-Saccharomycescerevisiaeantibody,ASCAELISA試劑盒人抗釀酒酵母抗體(ASCA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

植物細胞周期S后期同步(SYNCHRONY)處理試劑盒10

HumanTrypsinogen-2,Try-ELISAKit人*原Ⅱ(Try-)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
9R-HODE 50 ug     9R-xy7noxy-10E,12Z-octadecadienoic acid 9R-HODE

MA-CHMINACA 1 mg     AB-CHMINACA|AMB N-metxylcyclohexyl analog|MAB-AB-CHMINACA metxyl 1-cyclohexylmetxyl-1H-indazole-3-carbonyl-L-valinate

Annexin V-iFluor 350偶聯(lián)物     Annexin V-iFluor 350 conjugate

Docosaenoyl Ethanolamide 5 mg     N-2-xy7noxyetxyl-13Z-docosenamide; Docosaenoyl Ethanolamide

α-Linolenic Acid 1 g     9Z12Z,15Z-octadecatrienoic acid; ALA α-Linolenic Acid

4-3-Ethenyl-3,7-dimetxyl-1,6-octadienylpxenol     Bakuchiol
G-QGly-Gln

α-Mating Factor (1-6)Trp-His-Trp-Leu-Gln-Leu

[Nle4,DPhe7] a-MSH, amide;Melanotan Ac-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2

Biotin-Obestatin (human)Biotin-Phe-Asn-Ala-Pro-Phe-Asp-Val-Gly-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Val-Gln-Tyr-Gln-Gln-His-Ser-Gln-Ala-Leu-NH2

P69 (522-534), M. lepraePro-Glu-Lys-Thr-Ala-Ala-Pro-Ala-Ser-Asp-Pro-Thr-
即用型封堵液 (Nylon )50mL保存錄本ChlorobenzeneAR500mL

G8140-5MLGoldview5ml0

CG5611-1Gγ-Globulins(From Bovine) γ-球蛋白()9007-83-41g

2xPCRmix GC-Rich Master1ml(with Dye)

亮抑酶肽5mg

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