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更新時(shí)間:2017-07-17 12:43:17瀏覽次數(shù):134次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)鯡魚精 DNA 溶液1mL保存步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
鯡魚精 DNA 溶液1mL保存使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
鯡魚精 DNA 溶液1mL保存詳細(xì)說明書:
鯡魚精 DNA 溶液1mL保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。
大鼠異檸檬酸脫氫酶(ICD)ELISA試劑盒 ,英文名: ICD ELISA Kit
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人血清一氧化氮(NO)ELISA檢測(cè)試劑盒Humannitricoxide,NOELISAKit 96T/48T
驢黃體生成素(LH)免疫試劑盒 Donkey Luteinizing Hormone,LH ELISA Kit
CLIAKitforPROGRELISAkit大鼠孕同受體規(guī)格:48T/96T
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ELISAKitSCF/MGF人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長因子規(guī)格:48T/96T
小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat annexin V (ANX- V) ELISA Kit 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA試劑盒
Humansecretinreceptor,SRELISAKit 人促胰液素/分泌素受體(SR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-Reticulinantibody,ARAELISA試劑盒人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)試劑盒10次
HumanTumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
15(S)-HEDE (50 ug) 15S-xy7noxy-11Z,13E-eicosadienoic acid; 15(S)-HEDE
α-(difluorometxyl)-DL-Arginine (1 mg) DFMA|RMI 71897; 2-(difluorometxyl)arginine
Tetrametxylrhod胺-dUTP 溶解于1 mM Tris緩沖液(pH 7。5) Tetrametxylrhodamine-dUTP 1 mM in Tris Buffer (pH 7。5)
Tricosanoyl Ethanolamide (10 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tricos*; Tricosanoyl Ethanolamide
5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide (1 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-5Z,8Z,11Z-eicosatrienamide; Mead Acid Ethanolamide; 5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid Ethanolamide
emmonieted Ruthenium Oxychloride Ruthenium Red
gp100 (614-622)Leu-Ile-Tyr-Arg-Arg-Arg-Leu-Met-Lys
α-Conotoxin SIIle-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Gly-Pro-Lys-Tyr-Ser-Cys- NH2 (Disulfide bridges: Cys2-Cys7, Cys3-Cys13 )
[Met5,Arg6] Enkephalin-ArgTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Arg-Arg
Biotin-MBP Derivatized PeptideBiotin-LC-Phe-Phe-Lys-Asn-Ile-Val-Thr-Pro-Arg-Thr-Pro-Pro-Pro-Ser-Gln-Gly-Lys-NH2
P55-TNFRPro-Gln-Ile-Glu-Asn-Val-Lys-Gly-Thr-Glu-Asp
鯡魚精 DNA 溶液1mL保存正辛烷OctaneAR500mL
709980-5G甲基乙基砜(EMS)etxyl metxyl sulfone 594-43-45G0
A0332-50GAlbumin Bovine,Fraction V 牛血清白蛋白(五組分)9048-46-850g
Yeast DNA Kit100T
L-半胱安酸鹽酸鹽25g
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