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更新時間:2017-07-17 12:42:51瀏覽次數(shù):240次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)Denhardt 溶液,50×100mL說明書步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
Denhardt 溶液,50×100mL說明書使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第 8 步之后進行。
Denhardt 溶液,50×100mL說明書詳細說明書:
Denhardt 溶液,50×100mL說明書確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
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Humananti-rabiesvirusantibody,anti-RVELISA試劑盒人抗狂犬病毒抗體(anti-RV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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11(R)-HEDE (100 ug) 11R-xy7noxy-12E,14Z-eicosadienoic acid; 11(R)-HEDE
Hexanoyl Glycine (100 mg) NSC 224460; N-1-oxohexyl-glycine
iFluor 750-標記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml iFluor 750-streptavidin conjugate 1 mg/ml
Myristoyl Ethanolamide (100 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-tetradec*; AM 3165|Comperlan MM|Schercomid MME; Myristoyl Ethanolamide
11(Z),14(Z),17(Z)-Eicosatrienoic Acid (100 mg) 11Z,14Z,17Z-eicosatrienoic acid; 11(Z),14(Z),17(Z)-Eicosatrienoic Acid
(3S, Ryanodine
gp100 (457-466)Leu-Leu-Asp-Gly-Thr-Ala-Thr-Leu-Arg-Leu
α-Conotoxin GSAla-Cys-Ser-Gly-Arg-Gly-Ser-Arg-Cys-Hyp-Hyp-Gln-Cys-Cys-Met-Gly-Leu-Arg-Cys-Gly-Arg-Gly-Asn-Pro-Gln-Lys-Cys-Ile-Gly-Ala-His-Gla-Asp-Val
[Met5,Arg6,Phe7] EnkephalinTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Arg-Phe
Biotin-LC-KemptideBiotin-LC-Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-Gly
p3K, (Lys 58 Lys 60 Lys 63) Ea(52–68)Ala-Ser-Phe-Glu-Ala-Gln-Lys-Ala-Lys-Ala-Asn-Lys-Ala-Val-Asp-Lys-Ala
Denhardt 溶液,50×100mL說明書二乙胺DietxylamineCP500mL
CA1341B-100*1g瓊脂糖9012-36-6100*1g0
A5253-25GAlbumin Egg 卵清蛋白(雞)9006-59-125g
環(huán)境水樣DNA提取試劑盒50T
L-Asparagine, Anxy7nous100g
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