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更新時(shí)間:2017-07-17 12:42:26瀏覽次數(shù):210次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL特點(diǎn)詳細(xì)說明書:
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL特點(diǎn)使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無(wú)水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL特點(diǎn)確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤(rùn)。
2. 將濕潤(rùn)的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長(zhǎng)到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL特點(diǎn)步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠乙酰*轉(zhuǎn)移酶(CHAT)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人信號(hào)識(shí)別顆??贵w(SRP)免疫試劑盒 Human signal recognization particle antibody,SRP ELISA Kit
檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 可見分光光度法 10管/9樣
Ratmacrophageinflammatoryprotein1α,MIP-1αELISA試劑盒大鼠巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanguanylatenucleotidebindingprotein4,Gbp4ELISA試劑盒人鳥苷酸結(jié)合蛋白4(Gbp4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLeukemiainhibitoryfactor,LIFELISAKit人白血病抑制因子(LIF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鵝3β羥基類固醇脫氫酶(3β-HSD)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血栓前體蛋白(TpP)免疫試劑盒 Human thrombus precursor protein,TpP ELISA Kit
人抗肌聯(lián)蛋白抗體(TTN)ELISA試劑盒 ,英文名: TTN ELISA Kit
RatInsulin-likegrowthfactorbindingprotein4,IGFBP-4ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humangastriccarcinomaMarkerELISA試劑盒人胃癌標(biāo)志物ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterferonαAntibody,IFNα-AbELISAKit人抗α干擾素抗體(IFNα-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠骨粘連蛋白(ON)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat leptin receptor (LR/Ob-R) ELISA Kit 大鼠苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒
Human50%complementhemolysis,CH50ELISAKit 人血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-prothrombinsantibodies,aPT1/aPT2ELISA試劑盒人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞色素C釋放凋亡檢測(cè)試劑盒10次
Humantumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand4,TRAIL-R4ELISAKit人壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
11(R)-HEDE (25 ug) 11R-xy7noxy-12E,14Z-eicosadienoic acid; 11(R)-HEDE
β-Nicotinamide Mononucleotide (50 mg) β-NMN; 3-(aminocarbonyl)-1-(5-O-phosphono-β-D-ribofuranosyl)-pyridinium, inner salt
iFluor 680-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml iFluor 680-streptavidin conjugate 1 mg/ml
Pentadecanoyl Ethanolamide (50 mg) N-(2-xy7noxyetxyl)-pentadec*; Pentadecanoyl Ethanolamide
5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid (5 mg) 5Z,8Z,11Z-eicosatrienoic acid; Mead Acid; 5(Z),8(Z),11(Z)-Eicosatrienoic Acid
N-Acetyl-5-metxoxytryptamine; NSC 113928; Regulin; NSC 56423 Melatonin
gp100 (177-186)Ala-Met-Leu-Gly-Thr-His-Thr-Met-Glu-Val
α-Conotoxin EIArg-Asp-Hyp-Cys-Cys-Tyr-His-Pro-Thr-Cys-Asn-Met-Ser-Asn-Pro-Gln-Ile-Cys- NH2
[Met5,Arg6,7,Val8,Gly9] EnkephalinTyr-Gly-Gly-Phe-Met-Arg-Arg-Val-Gly
Biotin-Kinase Domain of Insulin Receptor (2)Biotin-Thr-Arg-Asp-Ile-pTyr-Glu-Thr-Asp-Tyr-Tyr-Arg-Lys
P38 (411-425), M. lepraeAla-Gly-Gly-Gly-Val-Thr-Leu-Leu-Gln-Ala-Ala-Pro-Ala-Leu-Asp
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL特點(diǎn)2,2-聯(lián)比啶2,2'-DipyridylAR1g
CA1021-1gABTS(2,2-連氮基-雙-(3-乙基本并二氫噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽)30931-67-01g0
P7125-10GProtein A *A
病毒DNA-RNA純化試劑盒50T
L-Ascorbic Acid100g
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