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更新時間:2017-07-17 12:38:23瀏覽次數(shù):161次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)超級雜交液 ( 芯片 )10mL保存使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時,請在第 8 步之后進(jìn)行。
超級雜交液 ( 芯片 )10mL保存詳細(xì)說明書:
超級雜交液 ( 芯片 )10mL保存確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
超級雜交液 ( 芯片 )10mL保存步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠乙酰丙酸δ脫水酶(ALAD)ELISA試劑盒 ,英文名: ALAD ELISA Kit
Human interleukin 13 (IL-13) ELISA Kit 人白介素13(IL-13)ELISA試劑盒
BovineInterleukin-2receptor,IL-2RELISAkit 牛白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforCgA(HumanChromogranin)ELISAKit人嗜鉻蛋白A規(guī)格:48T/96T
細(xì)胞總RNA純化試劑盒20次
Ratbasicfibroblastgrowthfactor4,bFGF-4ELISAKit大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4(bFGF-4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鵝雌二醇(E2) ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血吸蟲(SH)抗體免疫試劑盒 Human schistosoma haematobium(SH)antibody ELISA kit
人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒 ,英文名: ATMA/TMAB ELISA Kit
RatInsulin-likegrowthfactor2,IGF-2ELISA試劑盒大鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humangalactose-6-sulphatesulphatase,Gal-6SELISA試劑盒人半乳糖6酯酶(Gal-6S)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterferonγ,IFN-γELISAKit人γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human adrenergic receptor a1A (ADRA1A) ELISA Kit 人腎上腺素能a1A受體(ADRA1A)ELISA試劑盒
humanProstaglandinF,PG-FELISAKit 人前列腺素F(PGF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-perinuclearfactor,APFELISA試劑盒人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物細(xì)胞可溶性總蛋白制備試劑盒20次
Humantyrosinehydroxylase,THELISAKit人*羥化酶(TH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
8(S)-HETrE (50 ug) 8S-xy7noxy-9E,11Z,14Z-eicosatrienoic acid; 8(S)-HETrE
(S)-Ketoprofen (500 mg) (S)-2-(3-benzoylpxenyl)Propionic Acid|Dexketoprofen; (S)-3-benzoyl-α-metxyl-benzeneacetic acid
iFluor 488-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml iFluor 488-streptavidin conjugate 1 mg/ml
Prostaglandin E1 etxyl ester (1 mg) 11α,15S-dixy7noxy-9-oxo-prost-13E-en-1-oic acid, etxyl ester; Alprostadil etxyl ester|PGE1 etxyl ester; Prostaglandin E1 etxyl ester
Docosatrienoic Acid (50 mg) 13Z,16Z,19Z-docosatrienoic acid; Docosatrienoic Acid
α-Carboxybenzylpenicillin diwo7ium salt Carbenicillin diwo7ium
Glycoprotein IIb Fragment (656-667)Gly-Ala-His-Tyr-Met-Arg-Ala-Leu-Ser-Asn-Val-Glu
α-CGRP (19-37), humanSer-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2
[Lys8] VasopressinCys-Tyr-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2(Disulfide bridge:Cys1-Cys6)
Biotin-Glucagon-Like Peptide 1 (7-36), amide, humanBiotin-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-NH2
OVA PeptideIle-Ser-Gln-Ala-Val-His-Ala-Ala-His-Ala-Glu-Ile-Asn-Glu-Ala-Gly-Arg-NH2
超級雜交液 ( 芯片 )10mL保存以兒按四乙酸二鉀Dipotewwium EDTAAR100g
CA1121-5g酸性蛋白酶(1:50000)9025-49-45g0
L8754-5MGPHA-P (Phytohemagglutinin P) 植物血球凝聚集素P9008-97-35mg
組織RNA提取試劑盒50T
乙酸鑭5g
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