當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>RNA/DNA提取>>探針標記及檢測產(chǎn)品>> 超級雜交液 A(不含甲酰胺)100mL說明書
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更新時間:2017-07-17 12:39:18瀏覽次數(shù):135次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)超級雜交液 A(不含甲酰胺)100mL說明書使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液.
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。 注:通過第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時,乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質時,請在第 8 步之后進行。
超級雜交液 A(不含甲酰胺)100mL說明書詳細說明書:
超級雜交液 A(不含甲酰胺)100mL說明書確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預雜交步驟 預雜交就是用不含探針的超級雜交液跟印跡膜進行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會非特異地吸附探針分子的位點封閉,否則這些位點會吸附標記的探 針,造成高背景。
1. 將結合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤。
2. 將濕潤的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預先封口,再剪掉一角, 留一個小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級雜交液的比例沿小口 加入超級雜交液,然后用塑料封口機將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒入溫度設定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時,延長到 12-16 小時亦可。注意保溫過程中塑料袋應在不停 的搖動狀態(tài)中,使超級雜交液與印跡膜充分接觸。
超級雜交液 A(不含甲酰胺)100mL說明書步驟:
1. 如果標記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機封口)。探針的加入量視探針標記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應加大,而對于檢測克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時間一般為 6-12 小時。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過程中,一定不要使印跡。
大鼠乙醛脫氫酶(ALDH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人信號傳導子及轉錄激活子3(STAT3)免疫試劑盒 human STAT3 ELISA Kit
輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 高效液相色譜法 50管/48樣
Ratmacrophageinflammatoryprotein3β,MIP-3βELISA試劑盒大鼠巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanHeatShockProtein20,HSP-20ELISA試劑盒人熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanleukocyteantigenG,HLA-GELISAKit人類白細胞抗原G(HLA-G)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鵝促卵泡素(FSH)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血吸蟲抗原免疫試劑盒 Human schistosoma ELISA Kit
人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA試劑盒 ,英文名: AFA ELISA Kit
RatInsulinReceptorβ,ISR-βELISA試劑盒大鼠胰島素受體β(ISR-β)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanFreeTri-iodothyronineIndes,Free-T3ELISA試劑盒人游離三碘甲狀腺原氨酸(Free-T3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInterferonα,IFN-αELISAKit人α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠核因子kb(NF-kb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat ovalbumin specific IgE (OVA sIgE) ELISA Kit 大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒
humanAnti-ThyroidMicrosomeAntibody,ATMA/TMABELISAKIT 人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanAnti-OvaryAntibody,AOAbELISA試劑盒人抗卵巢抗體(AOAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物維生素E高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
Humantyrosinekinase2,Tyk-2ELISAKit人*激酶2(Tyk-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
5(S)-HETrE (100 ug) 5S-xy7noxy-6E,8Z,11Z-eicosatrienoic acid; 5(S)-HETrE
(S)-Ketoprofen (1 g) (S)-2-(3-benzoylpxenyl)Propionic Acid|Dexketoprofen; (S)-3-benzoyl-α-metxyl-benzeneacetic acid
mFluor Red 780-標記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml mFluor Red 780-streptavidin conjugate 1 mg/ml
α-Piperidinobutiopxenone (xy7nochloride) (10 mg) 1-pxenyl-2-(1-piperidinyl)-1-butenone, monoxy7nochloride; α-Piperidinobutiopxenone (xy7nochloride)
Docosatrienoic Acid (10 mg) 13Z,16Z,19Z-docosatrienoic acid; Docosatrienoic Acid
D-( Ampicillin wo7ium
Glycogen Synthase-derived peptideLys-Lys-Leu-Asn-Arg-Thr-Leu-Ser-Val-Ala
α-Calcitonin Gene Related Peptide, humanAla-Cys-Asp-Thr-Ala-Thr-Cys-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asn-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2 (Disulfide bridge Cys2-Cys7)
[Lys6] Leu-EnkephalinTyr-Gly-Gly-Phe-Leu-Lys
Biotin-Gastrin (1-17)Biotin-Glu-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2
Osteostatin amide (human)Thr-Arg-Ser-Ala-Trp-Leu-Asp-Ser-Gly-Val-Thr-Gly-Ser-Gly-Leu-Glu-Gly-Asp-His-Leu-Ser-Asp-Thr-Ser-Thr-Thr-Ser-Leu-Glu-Leu-Asp-Ser-Arg-NH2
超級雜交液 A(不含甲酰胺)100mL說明書1,1,1-三錄乙烷1,1,1-TrichloroethaneCP500mL
CA1151-5g鹽酸吖啶黃8063-24-95g0
C0130-100mgCollagenaseⅠ 膠原酶Ⅰ9001-12-1100mg
Stool DNA Kit100T
L-(+)-Arabinose100g
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