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更新時(shí)間:2017-07-14 13:39:17瀏覽次數(shù):152次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)PCR 法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次特點(diǎn)詳細(xì)說(shuō)明書:
PCR 法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次特點(diǎn)使用方法:
一、交換反應(yīng) 1. 實(shí)驗(yàn)前需自備的試劑:7 M 醋酸銨、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應(yīng)液.
3. 37℃反應(yīng) 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5~10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀時(shí)使其終濃度達(dá) 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷無(wú)水乙醇,-20℃放置 30~60 分鐘。
7. 離心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用適當(dāng) Buffer 溶解沉淀。 注:通過(guò)第 5~8 步操作幾乎可以除去大部分未反應(yīng)的[γ-32P] ATP,如要 *將其除去時(shí),乙醇沉淀后用凝膠過(guò)濾等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白質(zhì)時(shí),請(qǐng)?jiān)诘?/span> 8 步之后進(jìn)行。
PCR 法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次特點(diǎn)確定洗膜溫度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此條件下的洗膜溫度比 Tm 低 5-12℃,一般情況下可以在 55℃進(jìn)行洗膜。Oligo 探針可以室溫洗膜。 四、預(yù)雜交步驟 預(yù)雜交就是用不含探針的超級(jí)雜交液跟印跡膜進(jìn)行孵育,其目的是用所含 的非特異性 DNA 分子(鮭精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物將印 跡膜上會(huì)非特異地吸附探針?lè)肿拥奈稽c(diǎn)封閉,否則這些位點(diǎn)會(huì)吸附標(biāo)記的探 針,造成高背景。
1. 將結(jié)合了靶分子的硝酸纖維素印跡膜或尼龍印跡膜浸泡于自備的 6× SSC 溶液中,使其充分濕潤(rùn)。
2. 將濕潤(rùn)的印跡膜置于一塑料雜交袋中(塑料袋預(yù)先封口,再剪掉一角, 留一個(gè)小口),按每平方厘米印跡膜加 0.2 mL 超級(jí)雜交液的比例沿小口 加入超級(jí)雜交液,然后用塑料封口機(jī)將口封牢。 3. 將此塑料袋浸沒(méi)入溫度設(shè)定在雜交溫度的恒溫水浴中或雜交爐中,保 溫 1-2 小時(shí),延長(zhǎng)到 12-16 小時(shí)亦可。注意保溫過(guò)程中塑料袋應(yīng)在不停 的搖動(dòng)狀態(tài)中,使超級(jí)雜交液與印跡膜充分接觸。
PCR 法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次特點(diǎn)步驟:
1. 如果標(biāo)記的探針是雙鏈核酸,則需經(jīng)變性處理。具體操作是:根據(jù)探針濃 度和雜交所需探針的量計(jì)算出所需的探針體積,取出所需體積的探針到一 干凈的硅化的塑料離心管中,加入等體積的本產(chǎn)品,吹打混勻后室溫放置 5 分鐘變性后,將探針樣品放入冰浴中冷卻,加入 0.05 倍體積的自備的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等體積的自備的 0.4 M 的 HCl 溶液。 將探針樣品保存在冰浴中直至需要。如果是單鏈 DNA 或 RNA 探針,則 不需變性,直接使用。
2. 將單鏈探針或變性后的雙鏈探針加入到完成了預(yù)雜交的雜交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探針后用熱封機(jī)封口)。探針的加入量視探針標(biāo)記效率 而定,一般要求終濃度不能低于 1-2 ng/mL。如果檢測(cè)基因組中的單拷 貝基因,探針的加入量應(yīng)加大,而對(duì)于檢測(cè)克隆的基因片段,則探針的量 可減少。如果是放射性探針,應(yīng)將此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 雜交袋發(fā)生遺漏、污染工作環(huán)境。
3. 在選定的雜交溫度下繼續(xù)保溫,時(shí)間一般為 6-12 小時(shí)。 六、洗膜步驟。注意在下面的所有操作過(guò)程中,一定不要使印跡。
大鼠胰*α2A(AMY2A)ELISA試劑盒 ,英文名: AMY2A ELISA Kit
人抗浦肯野細(xì)胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanpurkinjecellautoantibody,PCA-1/YoELISAKit 96T/48T
大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)免疫試劑盒 Rat β-site APP-Cleaving Enzyme 1,BACE1 ELISA Kit
CLIAKitforT.gondii(HumanToxoplasmaGondiiELISAKit人剛地弓形蟲規(guī)格:48T/96T
人體Stat1基因甲基化檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitMSA人抗紡錘體抗體規(guī)格:48T/96T
小鼠Misato同源物1(MSTO1)ELISA試劑盒 ,英文名: MSTO1 ELISA Kit
人血小板膜糖蛋白Ⅳ(GP-Ⅳ)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanplaetmembraneglycoproteinⅣ,GP-ⅣELISAKit 96T/48T
大鼠固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1A(SREBP-1A)免疫試劑盒 Rat sterol regulatory element-binding protein 1A,SREBP-1A ELISA Kit
CLIAKitfor大鼠Smad7ELISAKit大鼠Smad7規(guī)格:48T/96T
磷脂酰肌醇PI(phosphatidylinositol)高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次
ELISAKitIgM*M規(guī)格:48T/96T
小鼠活化素A(Activin-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human neuron specific enolase (NSE) ELISA Kit 人神經(jīng)特異性烯醇化酶(NSE)ELISA試劑盒
humanBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 人β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humananti-Mi2-antibodyELISA試劑盒人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物培養(yǎng)細(xì)胞DNA損傷彗星熒光檢測(cè)試劑盒20次
HumanUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit人*型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Lyso-PAF C-16-d4 (100 ug) 1-O-hexadecyl-(7,7,8,8-d4)-sn-glyceryl-3-phosphorylcholine; Lyso-Plaet-activating Factor C-16-d4; Lyso-PAF C-16-d4
UNC3230 (1 mg) 5-[(cyclohexylcarbonyl)amino]-2-(pxenylamino)-4-thiazolecarboxamide
RPE-標(biāo)記鏈霉親和素偶聯(lián)物 1 mg/ml RPE-streptavidin conjugate 1 mg/ml
CAY10679 (10 mg) 1,1’-(1,8-dioxo-1,8-octanediyl)bis[glycyl-glycine; N,N’-bis(glycyl-glycine)-hexane-1,6-Dicarboxyamide; CAY10679
Linoleic Acid (1 g) 9Z,12Z-octadecadienoic acid; fairic Acid; Linoleic Acid
2-4(4-metxylpxenyl)-1,2-benzisothiazol-3(2H)-one Jumonji HDM Inhibitor, PBIT
Gliadin (43-49)(Gliadorphin) AlphaTyr-Pro-Gln-Pro-Gln-Pro-Phe
W-K-Y-M-V-M-NH2Trp-Lys-Tyr-Met-Val-Met-NH2
[Leu144, Arg147]-PLP (139-151), [L144, R147-PLP(139-151)]His-Ser-Leu-Gly-Lys-Leu-Leu-Gly-Arg-Pro-Asp-Lys-Phe
Biotin-[Gln1]-Gastrin I (human)Biotin-Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2
Obestatin, rat, mousePhe-Asn-Ala-Pro-Phe-Asp-Val-Gly-Ile-Lys-Leu-Ser-Gly-Ala-Gln-Tyr-Gln-Gln-His-Gly-Arg-Ala-Leu-NH2
PCR 法 DNA 探針標(biāo)記試劑盒5次特點(diǎn)二正丙胺DipropylamineCP250mL
CA1371-5g牛血清白蛋白(全組分)9048-46-85g0
ER0711Van91 I400 units
Plasmid Maxi Kit10T
Inositol100g
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