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電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2017-07-14 13:29:24瀏覽次數(shù):199次

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電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。

電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹:

電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞RA

GAD1 Others Human GAD67 / GAD1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

恒河猴腎細(xì)胞;RM-3

COS-1細(xì)胞,SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞 人大腸癌細(xì)胞,PA319細(xì)胞 CM-R005大鼠氣管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠胚胎心肌細(xì)胞;H9c2(2-1)

CD200 Others Human CD200 / OX-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人毛細(xì)胞HHDPC

KMML1 小白鼠肺成纖維樣細(xì)胞

CM-H075人腎足突細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

QBC-939, 人膽管癌細(xì)胞

人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞;NTERA-2 人小梁網(wǎng)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人毛細(xì)胞HHDPC

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/07/2009) HA 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

KMML1 小白鼠肺成纖維樣細(xì)胞

CM-H075人腎足突細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

QBC-939, 人膽管癌細(xì)胞

人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞;NTERA-2 人小梁網(wǎng)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Anti-Nm23-H1/FITC 熒光素標(biāo)記抑制基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Anti-XBP-1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

鼠抗人非受體型*激酶BTK單克隆抗體 Anti-BTK 0.1ml

Goat Anti-rabbit IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml

FUNDC1 英文名稱: X三體綜合征相關(guān)蛋白FUNDC1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh PP2A beta/PPP2CB 蛋白質(zhì)磷酸酶2B抗體 PP2A β PP2A-β 規(guī)格 0.1ml

Anti-XBP-1/FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子X盒結(jié)合蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

FCHO1 英文名稱: FCHO1蛋白抗體 0.2ml

BK通道蛋白抗體 Anti-BK channel 0.1ml

Anti-NKG2A/CD159a/KLRC1/FITC 熒光素標(biāo)記NK細(xì)胞受體2A/自然殺傷細(xì)胞活化性受體2A抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PPIB/Cyclophilin B 親環(huán)蛋白(親環(huán)素)PPIB抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-IL-17/RBITC(Interleukin-17) 羅丹明標(biāo)記白細(xì)胞介素17抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
電泳級(jí)尿素100g實(shí)驗(yàn)HSP-90 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白90Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143) 磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh FRS2 成纖維細(xì)胞生長因子受體底物2抗體 規(guī)格 0.2ml

ER ELISA Kit 大鼠雌激素受體 96T

SLC12A3 英文名稱: 鈉氯離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml

APC2 英文名稱: 腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2抗體 0.2ml

Anti-Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143) 磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

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