一管式 DNA 膠回收試劑盒30 次實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹：

一管式 DNA 膠回收試劑盒30 次實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對(duì)長度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
一管式 DNA 膠回收試劑盒30 次實(shí)驗(yàn)使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè)）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
一管式 DNA 膠回收試劑盒30 次實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
前列腺成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

GFRA1 Others Rat 大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

Peng EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞

家兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;2012083MSC

MCF-7 [MCF7], 人癌細(xì)胞系

人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞;U937 [U-937] 大鼠外周血白細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞總RNAHCPF tRNA

U87MG 人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

CL-0307SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞

轉(zhuǎn)化細(xì)胞 人卵巢成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人脈絡(luò)叢成纖維細(xì)胞總RNAHCPF tRNA

CD83 Others Mouse 小鼠 CD83 / HB15 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

U87MG 人惡性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

CL-0307SW1116(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞

轉(zhuǎn)化細(xì)胞 人卵巢成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
LTA(Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen) ELISA Kit 人非小細(xì)胞肺癌抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-ZEBRA 人類皰疹病毒4抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MGEA5 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶抗體(腦膜瘤表達(dá)抗原5) 規(guī)格 0.2ml

ODC(Human Ornithine decarboxylase) ELISA Kit 人鳥酸脫羧酶 96T

RDH13 英文名稱： *脫氫酶13抗體 0.2ml

CEP192 英文名稱： 中心體蛋白192抗體 0.1ml

Anti-ZEBRA 人類皰疹病毒4抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml

FUBP1 英文名稱： DNA解旋酶V抗體 0.2ml

癌相關(guān)抗原抗體 Anti-CA15-3 0.1ml

Anti-Nociceptin receptor/FITC 熒光素標(biāo)記孤菲肽受體/痛敏肽受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PP-1B 蛋白磷酸酯酶-1B抗體 規(guī)格 0.1ml

Anti-XRCC1/FITC 熒光素標(biāo)記X射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白/細(xì)胞堿基切除修復(fù)基因抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
一管式 DNA 膠回收試劑盒30 次實(shí)驗(yàn)BLC-1/CXCL13(Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1,BLC-1) ELISA Kit 人B-淋巴細(xì)胞趨化因子Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-fowl typhoid and pullorum disease 雞白痢、雞傷寒抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-rabbit IgG/APC APC標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格 0.1ml

CS(Human chondroitin sulfate) ELISA Kit 人軟骨素 96T

SLC37A4 英文名稱： 葡萄糖-6磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml

CCDC82 英文名稱： 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白82抗體 0.2ml

Anti-fowl typhoid and pullorum disease 雞白痢、雞傷寒抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml