4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹：

4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對長度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個實(shí)驗(yàn)使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-A2

GM2A Others Human 人 GM2A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CM-M057小鼠腎系膜細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

WM35, 人黑色素瘤細(xì)胞 神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞,M17細(xì)胞 PC-12分化(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)

小鼠肝癌細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]

IL10RB Others Human 人 IL10Rb 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
CDH17 Others Rat 大鼠 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞HLEC

大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

293T/17人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293T/17 DMEM+10%FBS

FGF19 Protein Human 重組人 FGF19 蛋白

BEL-7405(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人真皮成纖維母細(xì)胞-新生HDF-n
人淋巴內(nèi)皮細(xì)胞HLEC

CDH17 Others Rat 大鼠 Cadherin-17 / LI-cadherin / CDH17 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

293T/17人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293T/17 DMEM+10%FBS

FGF19 Protein Human 重組人 FGF19 蛋白

BEL-7405(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人真皮成纖維母細(xì)胞-新生HDF-n
P53 ELISA Kit 大鼠P53Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-ZNF300 鋅指蛋白300抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh FSTL5 卵泡抑素相關(guān)蛋白5抗體 規(guī)格 0.2ml

D1R ELISA Kit 大鼠多巴胺D1受體 96T

Neurotrophin 4 英文名稱： 神經(jīng)生長因子4/5抗體 0.1ml

APOBEC2 英文名稱： 載脂蛋白B-mRNA編輯酶復(fù)合物2抗體 0.2ml

Anti-ZNF300 鋅指蛋白300抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FANCD2 英文名稱： FANCD2抗體 0.1ml

半胱胺酸蛋白酶蛋白-3抗體 Anti-Caspase-3/CPP32/SCA-1 0.1ml

Anti-Phospho-Numb (Ser276)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化膜相關(guān)蛋白Numb抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Polycystin 1 多囊腎蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-ZNF307/FITC 熒光素標(biāo)記鋅指蛋白307抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個實(shí)驗(yàn)BMP-6(Human Bone Morphogenetic Protein 6) ELISA Kit 人骨形成蛋白6Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-MDM2 雙微體2癌基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh JAKMIP2/NECC1 JAK和微管相互作用蛋白2抗體(JAK和微管相互作用蛋白2) 規(guī)格 0.2ml

Human Coronaviruses IgG ELISA kit 人流行性乙型腦炎抗體IgG 96T

SLCO2A1 英文名稱： 溶質(zhì)載體蛋白家族21成員2抗體 0.2ml

phospho-delta 1 Catenin (Tyr96) 英文名稱： 磷酸化δ連環(huán)蛋白抗體 0.1ml

Anti-MDM2 雙微體2癌基因抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml