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更新時間:2017-07-14 13:06:38瀏覽次數(shù):123次
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預混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存
低載量 PCR 片段純化試劑盒50 次保存后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M行放射自顯影。
低載量 PCR 片段純化試劑盒50 次保存產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 的 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
低載量 PCR 片段純化試劑盒50 次保存使用方法:
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
人肺鱗癌細胞;NCI-H520
GPR56 Others Human 人 GPR56 / TM7LN4 人細胞裂解液 (陽性對照)
MDA-MB-468 人癌細胞
HCC827人非小細胞肺癌細胞 HCC827 cells in human non small cell lung cancer RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
SCGB1A1 Protein Human 重組人 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 標簽)
人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2 人小氣道平滑肌細胞*培養(yǎng)基 100mL
KLRC1 Others Cynomolgus 食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 人細胞裂解液 (陽性對照)
人晶狀體上皮細胞總RNAHLEpiC tRNA
貓星形腦膠質(zhì)細胞;PG-4(S+L-)
PC-3細胞,人胰腺癌細胞 人表皮癌細胞,A-431細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3
Hs 746T(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Gibco 17100017 Collagenase Type I 1g
人晶狀體上皮細胞總RNAHLEpiC tRNA
KLRC1 Others Cynomolgus 食蟹猴 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 人細胞裂解液 (陽性對照)
貓星形腦膠質(zhì)細胞;PG-4(S+L-)
PC-3細胞,人胰腺癌細胞 人表皮癌細胞,A-431細胞 小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3
Hs 746T(人胃癌細胞) 5×106cells/瓶×2
Gibco 17100017 Collagenase Type I 1g
Anti-phospho-SHC (Tyr349) /FITC 熒光素標記磷酸化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(NT) 凋亡蛋白活性因子-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 Anti-NF-M 0.1ml
Stra8 英文名稱: *激活基因8抗體 0.1ml
ELK1 英文名稱: 細胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-p90RSK (Thr573) 磷酸化*/*激酶p90RSK蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(NT) 凋亡蛋白活性因子-1(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Goat Anti-rat IgG/Cy5 Cy5標記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
phospho-FANCG (Ser383) 英文名稱: 磷酸化DNA損傷修復基因XRCC9抗體 0.1ml
CC趨化因子受體7抗體 Anti-CCR-7 0.1ml
Anti-NPY /FITC 熒光素標記神經(jīng)肽 Y抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PMVK 磷酸甲羥戊酸激酶抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-HBsAg/FITC 熒光素標記小鼠抗人乙肝表面抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
低載量 PCR 片段純化試劑盒50 次保存mouse IFN- Alpha 小鼠α-干擾素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ERK1/MAPK3 原活化蛋白激酶3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MTCH1 細胞增殖誘導蛋白60(早老素相關蛋白) 規(guī)格 0.2ml
HNP1-3(Human neutrophil peptide 1-3) ELISA Kit 人中性粒細胞防御素1-3 96T
SMCP 英文名稱: 線粒體相關富含半胱酸蛋白抗體 0.1ml
CD24 英文名稱: CD24抗體 0.1ml
Anti-ERK1/MAPK3 原活化蛋白激酶3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
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