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微量核酸沉淀劑10mL*

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更新時間:2017-07-14 13:04:00瀏覽次數(shù):194次

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微量核酸沉淀劑10mL*使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

微量核酸沉淀劑10mL*產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
微量核酸沉淀劑10mL*詳細(xì)介紹:

微量核酸沉淀劑10mL*使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/BisTEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
微量核酸沉淀劑10mL*后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M行放射自顯影。
角膜內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)

GRK5 Others Human GRK5 / GPRK5 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H292

NK-92MI細(xì)胞,人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞 表達HBV病毒的人肝細(xì)胞,HepG2.2.15細(xì)胞 CL-0192RBL-2H3(大鼠嗜堿性細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21

KIRREL Others Mouse 小鼠 KIRREL1 / NEPH1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
19. 干細(xì)胞系統(tǒng)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480]

CM-R040大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠T淋巴細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 Mouse

FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480]

19. 干細(xì)胞系統(tǒng)

CM-R040大鼠肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

小鼠T淋巴細(xì)胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 Mouse

FZD10 Others Mouse 小鼠 FZD10 / Frizzled-10 / CD350 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Phospho-TAK1 (Thr187)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

鼠抗呼吸道合胞病毒單克隆抗體 anti-RSV 0.1ml

SHP2 英文名稱: 蛋白酪酸磷酸酶2抗體 0.1ml

phospho-eIF4EBP1 (Ser64) 英文名稱: 磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-MK1/MAP2K1(Thr386) 磷酸化原活化蛋白激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml

Apo J/Clusterin- Alpha/ Beta(Apolipoprotein J) 凝聚素α/β抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Goat Anti-rat IgG/APC APC標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml

phospho-FLNA (Tyr1046) 英文名稱: 磷酸化細(xì)絲蛋白A抗體 0.1ml

造血干細(xì)胞抗原CD133抗體 Anti-CD133 antigen 0.1ml

Anti-NR1/NMDAR1/GLUR1/FITC 熒光素標(biāo)記*受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PMPCB 線粒體導(dǎo)肽水解酶β抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-AFP/FITC 熒光標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
微量核酸沉淀劑10mL*sLR(Human Leptin Soluble Receptor) ELISA Kit 人可溶性瘦素受體Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-FSH receptor 促卵泡刺激素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Bio *標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.3ml

Human Protein Z ELISA Kit 人蛋白Z 96T

SNAIL + SLUG 英文名稱: 鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug+SNAIL抗體 0.1ml

CSTP1 英文名稱: 鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶CSTP1抗體 0.2ml

Anti-FSH receptor 促卵泡刺激素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

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