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更新時間:2017-07-14 13:03:24瀏覽次數(shù):256次
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預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存
分子生物學(xué)級糖原溶液,10mg/mL1mL實驗后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M行放射自顯影。
分子生物學(xué)級糖原溶液,10mg/mL1mL實驗詳細(xì)介紹:
分子生物學(xué)級糖原溶液,10mg/mL1mL實驗產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 的 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
分子生物學(xué)級糖原溶液,10mg/mL1mL實驗使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實驗條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
GRK6 Others Human 人 GRK6 / GPRK6 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4B3
SH-SY5Y細(xì)胞,神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 人膽囊癌細(xì)胞,GBC-SD細(xì)胞 CL-0048Ca Ski(人上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株;7WCY1.0
IL32 Others Human 人 Interleukin-32 / IL-32 (isoform alpha) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T]
HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞
RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 [X464-20C]細(xì)胞 Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)
人十二脂腸腺癌;HuTu-80
CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;LS 174T [LS174T]
TLR2 Others Rat 大鼠 TLR2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞
RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元 [X464-20C]細(xì)胞 Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)
人十二脂腸腺癌;HuTu-80
CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Phospho-TAK1 (Thr184)/FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
apoA1 (Apolipoprotein/APOA1 protein )human 載脂蛋白A1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
RRAD抗體 Anti-RRAD 0.1ml
SLC24A5 英文名稱: 可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運蛋白SLC24A5抗體 0.1ml
EHHADH 英文名稱: 三羥酰輔酶A脫氫酶抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MK1/MAPKK1(Ser298) 磷酸化原活化蛋白激酶激酶1抗體 規(guī)格 0.1ml
apoA1 (Apolipoprotein/APOA1 protein )human 載脂蛋白A1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Goat Anti-rat IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml
FANCG 英文名稱: DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體 0.1ml
多配體聚糖抗體 anti-Syndecan-1/CD138 0.1ml
Anti-NR1/NMDAR1/FITC 熒光素標(biāo)記*受體1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh PMP22 外周髓鞘蛋白-22抗體 規(guī)格 0.1ml
Anti-AFP/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(包被)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
分子生物學(xué)級糖原溶液,10mg/mL1mL實驗mouse adiponectin 小鼠脂聯(lián)素Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-ET-1(whole serum) 內(nèi)皮素-1抗體(抗血清)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MRPS4/IMP3 線粒體核糖體蛋白S4抗體 規(guī)格 0.2ml
ABP(Human Androgen Binding Protein) ELISA Kit 人雄激素結(jié)合蛋白 96T
SNF2L 英文名稱: 解旋酶SNF2L抗體 0.2ml
phospho-cardiac Troponin I (Thr143) 英文名稱: 磷酸化心肌肌鈣蛋白抗體 0.2ml
Anti-ET-1(whole serum) 內(nèi)皮素-1抗體(抗血清)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
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