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DNA 級(jí) Acryl 助沉劑1mL*

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更新時(shí)間:2017-07-14 13:02:08瀏覽次數(shù):167次

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DNA 級(jí) Acryl 助沉劑1mL*使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

DNA 級(jí) Acryl 助沉劑1mL*后續(xù)處理:
1. 染色觀(guān)察:將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi),直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀(guān)察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi),用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái),然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。

DNA 級(jí) Acryl 助沉劑1mL*產(chǎn)品及特點(diǎn):

尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開(kāi)即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱(chēng)取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀(guān)察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
DNA 級(jí) Acryl 助沉劑1mL*使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱(chēng)取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基MSCM-sf

GST Others Schistosoma japonicum 日本血吸蟲(chóng) Glutathione S-transferase / GST 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人胚腎二倍體細(xì)胞;HEK-2

EL4. IL-2細(xì)胞,淋巴瘤細(xì)胞 人結(jié)腸癌細(xì)胞,Loo細(xì)胞 CM-H037人結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

大鼠骨髓瘤細(xì)胞;IR983F

CEACAM5 Others Human CEACAM5 / CD66e 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
PLAU Others Human Urokinase / PLAU (activated by trypsin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29

Daudi 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞

LoVo人結(jié)腸癌細(xì)胞 LoVo human colon cancer cells DMEM/F12(1:1)+10% FBS

TNFSF8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

人非色素睫狀上皮細(xì)胞 (HNPCEpiC)( 5×105 ) LX-2, 人肝星形細(xì)胞株 Human
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HT-29

PFKFB3 Others Human PFK2 / PFKFB3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CM-R014大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

GBC-SD, 人膽囊癌細(xì)胞 猴腎細(xì)胞,HepII細(xì)胞 TE 354.T(人皮膚基底細(xì)胞癌)

綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC-GFP

ADAM12 Others Human ADAM12 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Anti-Tau protein/FITC 熒光素標(biāo)記微管相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

AQP1(Aquaporin1) 水通道蛋白-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1抗體 Anti-SDF-1/CXCL12 0.1ml

Sema3A 英文名稱(chēng): 臂板蛋白3A抗體 0.1ml

UBR5 英文名稱(chēng): E3泛素蛋白連接酶EDD抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MEF2D(Ser180) 磷酸化肌細(xì)胞特異性增強(qiáng)因子2D抗體 規(guī)格 0.1ml

AQP1(Aquaporin1) 水通道蛋白-1抗原Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Goat Anti-rat IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.1ml

Filamin A 英文名稱(chēng): 細(xì)絲蛋白A抗體 0.2ml

上皮型鈣粘附分子/血管內(nèi)皮鈣粘蛋白抗體 Anti-CD/VECD 0.1ml

Anti-NR2A/NMDAR2A /FITC 熒光素標(biāo)記*受體2A抗體(N)IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PMCA4B 細(xì)胞膜鈣ATP4B抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-AFP/Biotin *化鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(檢測(cè))IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
DNA 級(jí) Acryl 助沉劑1mL*IGF- II 大鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子-Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-EDNRA 內(nèi)皮素受體A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Myotilin 肌收縮蛋白MYOT抗體 規(guī)格 0.1ml

CIC(Human circulating immune complex) ELISA Kit 人循環(huán)免疫復(fù)合物 96T

SNX2 英文名稱(chēng): 分選連接蛋白2抗體 0.2ml

CD19 英文名稱(chēng): CD19抗體 0.1ml

Anti-EDNRA 內(nèi)皮素受體A抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

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