DNA 電泳分子量標準 (3)pUC19/MspI50 次實驗詳細介紹：

DNA 電泳分子量標準 (3)pUC19/MspI50 次實驗產品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產品。它具有下列特點: 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對長度各異 的 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
DNA 電泳分子量標準 (3)pUC19/MspI50 次實驗使用方法：
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿（詳見該產品的使用手冊）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會降低聚合反應效率）。但如果實驗條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
DNA 電泳分子量標準 (3)pUC19/MspI50 次實驗后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉移到帶正電的尼龍膜上，然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經過同位素標記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向對置進行放射自顯影。
人前列腺成纖維細胞裂解物HPrFL

HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠胚胎成纖維細胞;C3H 10T1/2 2A6

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3E5 *(含100mL酶解緩沖液) 10mL

THP-1人單核白血病細胞 Human

CNTNAP2 Others Mouse 小鼠 CNTNAP2 / PR2 人細胞裂解液 (陽性對照)
SECTM1 Others Human 人 SECTM1 / K12 人細胞裂解液 (陽性對照)

人角膜上皮細胞HCEpiC

HMy2.CIR 人 B 淋巴母細胞

CM-R011大鼠肺大動脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞

EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1036 人神經小膠質細胞*培養(yǎng)基 100mL
人角膜上皮細胞HCEpiC

SECTM1 Others Human 人 SECTM1 / K12 人細胞裂解液 (陽性對照)

HMy2.CIR 人 B 淋巴母細胞

CM-R011大鼠肺大動脈內皮細胞*培養(yǎng)基100mL

MiaPaCa-2, 人胰腺癌細胞

EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMY1036 人神經小膠質細胞*培養(yǎng)基 100mL
Anti-Tie2/FITC 熒光素標記上皮生長因子樣域*激酶2IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ATF6(activating transcription factor 6) 活化轉錄因子6抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

src原癌基因抗體 Anti-SRC 0.2ml

Styk1 英文名稱： 絲酸/蘇酸/酪酸激酶STYK1抗體 0.2ml

Phospho-Estrogen Receptor alpha (Ser167) 英文名稱： 磷酸化雌激素受體ER alpha 抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAP4(Ser1046) 磷酸化微管相關蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml

ATF6(activating transcription factor 6) 活化轉錄因子6抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Goat Anti-Mouse IgG/FITC FITC標記的羊抗小鼠IgG 0.3ml

Factor XII heavy chain 英文名稱： *12重鏈抗體 0.2ml

CD44抗體 Anti-CD44 0.1ml

Anti-NSE/FITC 熒光素標記神經元特異性烯醇化酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLEKHM2/SKIP 血小板白細胞C激酶底物同源結構域M2抗體 規(guī)格 0.2ml

Goat Anti-human C3/HRP 辣根過氧化物酶標記羊抗人補體C3Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
DNA 電泳分子量標準 (3)pUC19/MspI50 次實驗IFN- Beta/IFNB(Human Interferon Beta) ELISA Kit 人β干擾素Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-FPRL1 脂氧素受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh Mouse Anti-human IgM/Cy5.5 Cy5.5標記的小鼠抗人IgM 規(guī)格 0.1ml

C/EBP Epsilon (Human CCAAT/enhancer binding protein epsilon) ELISA Kit 人CCAAT增強子結合蛋白ε 96T

SOX21 英文名稱： 轉錄因子21抗體 0.2ml

CLDND2 英文名稱： 膜蛋白CLDND2抗體 0.2ml

Anti-FPRL1 脂氧素受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml