DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/MspI50 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開(kāi)即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱(chēng)取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/MspI50 次運(yùn)輸詳細(xì)介紹：

DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/MspI50 次運(yùn)輸使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿（詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè)）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱(chēng)取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/MspI50 次運(yùn)輸后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi)，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi)，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái)，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基FM-sf-prf

HA Others H2N2 甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;CGM1

正常大鼠腎細(xì)胞;NRK 結(jié)腸腺癌細(xì)胞，COLO-320細(xì)胞 ST細(xì)胞，豬細(xì)胞系(ST)

Ca Ski, 人細(xì)胞 Human

HAVCR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 HAVCR1 / TIM1 / TIMD1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
THOP1 Others Mouse 小鼠 THOP1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人角膜上皮細(xì)胞cDNAHCEpiC cDNA

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1

MGC80-3細(xì)胞，胃癌細(xì)胞 人喉癌細(xì)胞,TU212細(xì)胞 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK

雜交瘤(B類(lèi));Z153A2A5B3A12

RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人角膜上皮細(xì)胞cDNAHCEpiC cDNA

THOP1 Others Mouse 小鼠 THOP1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-1

MGC80-3細(xì)胞，胃癌細(xì)胞 人喉癌細(xì)胞,TU212細(xì)胞 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK

雜交瘤(B類(lèi));Z153A2A5B3A12

RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Anti-Tie1/FITC 熒光素標(biāo)記血管生成素-1受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

ATM(ataxia angiectasia mutated) 毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

抗spindly抗體 anti-SPY 0.1ml

SCN11A 英文名稱(chēng)： 鈉通道蛋白11α抗體 0.2ml

EGFP 英文名稱(chēng)： 重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAP4(Ser1073) 磷酸化微管相關(guān)蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml

ATM(ataxia angiectasia mutated) 毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Goat Anti-Mouse IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

Factor XI light chain 英文名稱(chēng)： *11輕鏈抗體 0.2ml

CD45抗體 Anti-CD45 0.1ml

Anti-Ntn1/FITC 熒光素標(biāo)記軸突導(dǎo)向因子1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLEKHM1 石骨癥相關(guān)蛋白PLEKHM1抗體 規(guī)格 0.2ml

Goat Anti-human IgA/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)pBR322/MspI50 次運(yùn)輸Collagen I 小鼠I型膠原Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-DUSP1/MKP-1 原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh MTBP/MDM2BP 雙微體2癌基因結(jié)合蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml

TPS(Human Total protein S) ELISA Kit 人總蛋白S 96T

SOX30 英文名稱(chēng)： 轉(zhuǎn)錄因子SOX30抗體 0.1ml

CD14 英文名稱(chēng)： 內(nèi)毒素受體抗體 0.1ml

Anti-DUSP1/MKP-1 原活化蛋白激酶磷酸酶-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml