DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) （2）（50-400 bp）50 次實驗-上海莼試生物技術(shù)有限公司

DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (2)（50-400 bp）50 次實驗產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對長度各異的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (2)（50-400 bp）50 次實驗詳細(xì)介紹：

DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (2)（50-400 bp）50 次實驗使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶，立即使用。注意：放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中）。充分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去除溶液中的氧氣（氧氣會降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實驗條件有限，此步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (2)（50-400 bp）50 次實驗后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1

HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL

TE-1人食管癌細(xì)胞 Human esophageal cancer cell line TE-1. RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

IL3 Protein Rat 重組大鼠 IL3 / interleukin 3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人毛發(fā)干細(xì)胞(HHDPC)( 5×105 ) MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞 Mouse
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶

人晶狀體上皮細(xì)胞RNAHLEpiC miRNA5 μg

兔主動脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1 腦神經(jīng)瘤細(xì)胞，Neuro-2A細(xì)胞 SH3細(xì)胞，小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞

人胚肺二倍體細(xì)胞;HL

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶

HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/3/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人晶狀體上皮細(xì)胞RNAHLEpiC miRNA5 μg

兔主動脈平滑肌細(xì)胞;CCC-SMC-1 腦神經(jīng)瘤細(xì)胞，Neuro-2A細(xì)胞 SH3細(xì)胞，小鼠B淋巴細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞

人胚肺二倍體細(xì)胞;HL

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
phospho-ERK1/MAPK-1/2(pThr183 + pTyr185) 磷酸化原活化蛋白激酶1/2抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體 Anti-ATP-sensitive K+ channel subunit Kir6.2 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Tyr1110) 磷酸化表皮生長因子受體抗體規(guī)格 0.1ml

DMEM高糖培養(yǎng)液 250ml 國產(chǎn)

ZNF852 英文名稱：鋅指蛋白852抗體 0.2ml

DCP 英文名稱：異常*原/脫-γ-羧基*原抗體 0.2ml

ATP敏感性鉀通道亞基kir6.2抗體 Anti-ATP-sensitive K+ channel subunit Kir6.2 0.1ml
Goat Anti-Bovine IgG/AP 堿性磷酸酶(AP)標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml

Flotillin 2 英文名稱：表皮細(xì)胞表面抗原1抗體 0.2ml

細(xì)胞間粘附分子-1抗體 Anti-CD54/ICAM-1 0.1ml

Anti-NTCP/FITC 熒光素標(biāo)記鈉離子/磺膽酸共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLDL1/PLCE 磷脂酶C1樣蛋白抗體規(guī)格 0.2ml

Goat Anti-mouse IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (2)（50-400 bp）50 次實驗TNF- Beta 大鼠壞死因子-βMulti-class antibodies規(guī)格： 48T