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DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸

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更新時間:2017-07-14 12:46:39瀏覽次數(shù):132次

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DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸使用方法 一、準(zhǔn)備工作 1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。 2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩沖液待用。

DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來,然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。

DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸詳細(xì)介紹:

DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對長度各異 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊)。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40% Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 500 uL 10%過硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
魚源細(xì)胞

HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Perth/16/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

II型膠原酶(10mL酶解緩沖液) 1mL

U-373MG-EGFP(Ubc-EGFP慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-373MG-EGFP (Ubc-EGFP lentiviral construct stable strain) of human brain glioma cells DMEM+10% FBS

IL2 Protein Mouse 重組小鼠 Interleukin-2 / IL-2 蛋白

人成纖維母細(xì)胞-新生兒(HDF-n)( 5×105 ) MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞 Mouse
PARP1 Others Mouse 小鼠 PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓總RNAHMSC-bm tRNA

家貓肺細(xì)胞;FCA-L1

HCCC-9810細(xì)胞,膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 *系,HL細(xì)胞 小鼠肝癌細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]

小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32

RTN4R Others Mouse 小鼠 Nogo Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人間充質(zhì)干細(xì)胞-骨髓總RNAHMSC-bm tRNA

PARP1 Others Mouse 小鼠 PARP-1 / PARP 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

家貓肺細(xì)胞;FCA-L1

HCCC-9810細(xì)胞,膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 *系,HL細(xì)胞 小鼠肝癌細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6]

小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32

RTN4R Others Mouse 小鼠 Nogo Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Anti-WEE1 protein/FITC 熒光素標(biāo)記WEE1蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

AU1 tag peptide AU1 tag標(biāo)簽多肽Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

腺苷A2A受體抗體 Anti-A2AR/Adenosine A2A-R 0.1ml

Sauvagine 英文名稱: 蛙皮降壓肽抗體 0.2ml

phospho-Ephrin B(Ser287) 英文名稱: 磷酸化Ephrin B抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh Phospho-FoxO4 (Ser193) 磷酸化叉頭蛋白4抗體 規(guī)格 0.1ml

AU1 tag peptide AU1 tag標(biāo)簽多肽Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Goat Anti-Bovine IgG/Cy7 Cy7標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml

FAIM2 英文名稱: FAS凋亡抑制分子2 0.1ml

細(xì)胞間粘附分子-2抗體 Anti-ICAM-2/CD102 0.2ml

Anti-NTN/FITC 熒光素標(biāo)記神經(jīng)生長因子抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLCZ1 磷酸肌醇磷脂酶PLCZ1抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-mouse IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗小鼠IgMMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (300-10000 bp)50 次運(yùn)輸PGE1 大鼠前列腺素1Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-Phospho-EGFR(Tyr1086) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Rhesus antibody Rh MyoD1/Myf3 肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Hb-AGE(Human hemoglobin-advanced glycosylation end products) ELISA Kit 人血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物 96T

SP3 英文名稱: 轉(zhuǎn)錄因子SP3抗體 0.1ml

CK14+17+42+10 英文名稱: 細(xì)胞角蛋白14抗體 0.1ml

Anti-Phospho-EGFR(Tyr1086) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

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