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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>RNA/DNA提取>>核酸電泳及回收>> 綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL保存
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更新時(shí)間:2017-07-14 12:37:56瀏覽次數(shù):149次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (29:1)100g運(yùn)輸
預(yù)混型丙烯酰胺 - 甲叉雙丙烯干粉 (19:1)100g保存
PAGE 膠長(zhǎng)加樣槍頭1盒實(shí)驗(yàn)
綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA,尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法,但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣,為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式,含有電泳所需要的所有試劑,即開即用,十分方便,免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活,可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE,以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液,可以防止甘油的干擾。
綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL保存使用方法:
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿(詳見該產(chǎn)品的使用手冊(cè))。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍,得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中,按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水,搖晃致溶, 立即使用。注意:放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積,一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液,配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制:在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水,然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低,不會(huì)溶解在這少量溶液中)。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積,在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右,直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后,將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣(氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率)。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限,此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意:即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化,TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠,然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后,在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用,需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液,充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL保存后續(xù)處理:
1. 染色觀察:將凝膠一面的玻璃板揭開,直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色,包括銀染(固定、漂洗、顯影和定影等步驟)、EB(每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液)、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen(每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液)。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交:按上法用 EB 等染料染色后,UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置,切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上,然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影:如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記,則將凝膠一面的 玻璃板揭開,用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái),然后包上保 鮮膜,真空抽干,然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
前脂肪細(xì)胞分化培養(yǎng)基PADM-prf
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/chicken/VietNam/NCVD-016/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMYF
大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-E 紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞,HEL299細(xì)胞 PT67細(xì)胞,鼠逆轉(zhuǎn)錄酶病毒包裝細(xì)胞
JEC, 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系 Human
LRP1 Others Human 人 LRP1 / A2MR / CD91 (aa 786-1165) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
SPN Others Mouse 小鼠 SPN / CD43 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4
EJ 人膀胱癌細(xì)胞
SW1116人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 SW1116 human colon adenocarcinoma cells L-15培養(yǎng)基(GIBCO)+10%FBS
CD70 Protein Rat 重組大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
人脂肪細(xì)胞-內(nèi)臟(HPA-v)(1×106 ) MDA-MB-231(ATCC來(lái)源), 人癌細(xì)胞 Human
人急性淋巴母細(xì)胞性白血病細(xì)胞;MOLT-4
FGFR1 Others Human 人 FGFR1 / CD331 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CM-H110人皮膚肥大細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
5-8F, 人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細(xì)胞系 淋巴瘤,EL4IL-2細(xì)胞 PC-12(大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤)
小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11
PDGFRB Others Human 人 CD140b / PDGFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
Anti-TIMP-2/FITC 熒光素標(biāo)記金屬蛋白酶組織抑制因子-2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Bak(BCL2 homologous antagonist/killer) Bcl-2同源拮抗劑Bak(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2mg
滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1抗體 Anti-SYVN1 hu、 rat、 mo、 cattle 0.2ml
Phospho-Stathmin(Ser25) 英文名稱: 磷酸化原癌基因蛋白18 0.1ml
EPS8 英文名稱: 表皮生長(zhǎng)因子受體底物8抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Phospho-LRP6(Thr1479) 磷酸化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格 0.1ml
Bak(BCL2 homologous antagonist/killer) Bcl-2同源拮抗劑Bak(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2mg
Goat Anti-Bovine IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
FGF3 英文名稱: 纖維母細(xì)胞生長(zhǎng)因子3抗體 0.1ml
周期素依賴性激酶6抗體 Anti-CDK6 0.2ml
Anti-OCT2 /FITC 熒光素標(biāo)記陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh plant lectin B4/IB4 植物凝集素IB4 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗馬IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
綠如蘭核酸染料 ( 可見光型 )10mL保存Ret IgM ELISA Kit 大鼠免疫球蛋白MMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-phospho-Ephrin B (Tyr324/329) 磷酸化Ephrin B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh MTTP 微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 規(guī)格 0.2ml
SAP(Human Serum amyloid P) ELISA Kit 人血清淀粉樣蛋白P 96T
SPDEF 英文名稱: 上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.1ml
CARD6 英文名稱: 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 0.2ml
Anti-phospho-Ephrin B (Tyr324/329) 磷酸化Ephrin B抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
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