SYBR Green II 核酸染料100 μL保存產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開(kāi)即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
SYBR Green II 核酸染料100 μL保存使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿（詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè)）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
SYBR Green II 核酸染料100 μL保存后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi)，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi)，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái)，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類(lèi));F9-CAG-tTA-3A1

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Hubei/2011) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

Lewis瘤 肺癌

JAR人胎盤(pán)絨毛癌細(xì)胞 Human placental villous carcinoma cells JAR DMEM+10%FBS

GREM1 Protein Mouse 重組小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人正常來(lái)源細(xì)胞 PC-12(高分化)，PC12，大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株(高分化) Rattus
EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人滑膜細(xì)胞總RNAHS tRNA

MDA-MB-231 人癌細(xì)胞

CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1 人胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
人滑膜細(xì)胞總RNAHS tRNA

EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

MDA-MB-231 人癌細(xì)胞

CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞

人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1 人胃粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
ets1/E26 (E-twenty six 1) Ets轉(zhuǎn)錄因子家族ets1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Bax(小鼠來(lái)源抗體) Anti-Bax 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Ser768) 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml

F12培養(yǎng)基 (Ham) 10×1L Gibco

ZNF131 英文名稱： 鋅指蛋白131抗體 0.2ml

GP340 英文名稱： 抑癌基因抗體 0.1ml

Bax(小鼠來(lái)源抗體) Anti-Bax 0.1ml
Rabbit Anti-horse IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FAM29A 英文名稱： FAM29蛋白抗體 0.2ml

軟骨糖蛋白39抗體 Anti-CDR/YKL-40 0.1ml

Anti-ompF/FITC 熒光素標(biāo)記小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PLAGL1/ZAC1 多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml

Rabbit Anti-human IgA/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗人IgAMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
SYBR Green II 核酸染料100 μL保存IL-19 大鼠白介素-19Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Defensin Beta 2/DEFB2 防御素β2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh NDUFV2 NADH脫氫酶黃素蛋白2抗體 規(guī)格 0.1ml

Human Plaet Factor 4,PF-4 ELISA Kit 人血小板因子4 96T

SPG21 英文名稱： 痙攣性截癱相關(guān)蛋白21抗體 0.2ml

C22orf23 英文名稱： 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框23抗體 0.2ml

Anti-Defensin Beta 2/DEFB2 防御素β2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml