DNA 非變性 PAGE 上樣液10mL實(shí)驗(yàn)詳細(xì)介紹：

DNA 非變性 PAGE 上樣液10mL實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品及特點(diǎn):
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨(dú) 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開(kāi)發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點(diǎn): 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開(kāi)即用，十分方便，免去了 實(shí)驗(yàn)人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對(duì)長(zhǎng)度各異 的 RNA 進(jìn)行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
DNA 非變性 PAGE 上樣液10mL實(shí)驗(yàn)使用方法：
一、準(zhǔn)備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺(tái)面和器皿（詳見(jiàn)該產(chǎn)品的使用手冊(cè)）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過(guò)硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過(guò)硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過(guò)硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時(shí)間不要超過(guò)一周。
二、配制凝膠
1. 估計(jì)所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來(lái)以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會(huì)溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會(huì)降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實(shí)驗(yàn)條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過(guò)硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過(guò)硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當(dāng)量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過(guò)度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個(gè)加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來(lái)。
DNA 非變性 PAGE 上樣液10mL實(shí)驗(yàn)后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開(kāi)，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進(jìn)行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進(jìn)行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進(jìn)行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過(guò)同位素標(biāo)記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開(kāi)，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過(guò)來(lái)，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M(jìn)行放射自顯影。
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞;MuM-2B

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Viet Nam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

MDA-MB-436 人腺癌細(xì)胞

NCI-H358人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NCI-H358 cells in human non small cell lung cancer RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

KITLG Protein Human 重組人 SCF / C-kit ligand 蛋白 (aa 1-189, His 標(biāo)簽)

人胚胎腸粘膜組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HIE-2 人肺成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人滑膜細(xì)胞HS

大鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

HMy2.CIR人B淋巴母細(xì)胞 HMy2.CIR human B lymphoblastoid cell IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS

FGF9 Protein Canine 重組狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

A3(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 子宮癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml
人滑膜細(xì)胞HS

EPHA4 Others Rat 大鼠 EphA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

大鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL

HMy2.CIR人B淋巴母細(xì)胞 HMy2.CIR human B lymphoblastoid cell IMDM培養(yǎng)基(GIBCO)+20%FBS

FGF9 Protein Canine 重組狗 FGF9 / FGF-9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

A3(人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 子宮癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml
Anti-TLR3 /FITC 熒光素標(biāo)記Toll樣受體3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BCHE(butyrylcholinesterase)NT 丁酰*脂酶抗原(N端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

組織因子途徑抑制劑-2抗體 Anti-TFPI-2 0.1ml

Phospho-Smad3 (Ser425) 英文名稱： 磷酸化細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD3抗體 0.1ml

Phospho-EGFR (Tyr998) 英文名稱： 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-LCK(Tyr394) 磷酸化淋巴細(xì)胞特異性蛋白*激酶抗體 規(guī)格 0.1ml

BCHE(butyrylcholinesterase)NT 丁酰*脂酶抗原(N端)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Rabbit Anti-horse IgM/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FAM96B 英文名稱： FAM96B蛋白抗體 0.2ml

癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子8抗體 Anti-CEAcam8/CD67 0.2ml

Anti-mu Opioid receptor/FITC 熒光素標(biāo)記μ-型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKN2 蛋白激酶N2抗體 規(guī)格 0.1ml

Rabbit Anti-monkey IgM/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗猴IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
DNA 非變性 PAGE 上樣液10mL實(shí)驗(yàn)IL-17 大鼠白介素-17Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Defensin Beta 1 防御素β1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Nebulin 伴肌動(dòng)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Human leukotriene E4,LT-E4 ELISA Kit 人白三烯E4 96T

SPG48 英文名稱： SPG48蛋白抗體 0.2ml

C1orf147 英文名稱： 1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框147抗體 0.2ml

Anti-Defensin Beta 1 防御素β1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml