miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL實驗產(chǎn)品及特點:
尿素-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Urea PAGE)是目前分離 200 nt 以下的小片段 RNA，尤其是 20 nt 左右的 microRNA(miRNA)分子的主要方法，但是單獨 配制各種溶液十分繁瑣，為此天澤基因開發(fā)了本產(chǎn)品。它具有下列特點: 1. 一站式，含有電泳所需要的所有試劑，即開即用，十分方便，免去了 實驗人員稱取有毒物品。 2. 靈活，可以根據(jù)需要配制各種濃度的 Urea-PAGE，以便對長度各異 的 RNA 進行電泳。 3. 電泳后可直接用于 UV 觀察、銀染、膠回收、Northern 雜交和放射自 顯影等。 4. 使用新型緩沖液，可以防止甘油的干擾。
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL實驗詳細介紹：

miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL實驗使用方法：
一、準備工作
1. 用固相 RNase 清除劑清潔工作的臺面和器皿（詳見該產(chǎn)品的使用手冊）。
2. 配制 1 X 電泳緩沖液 將適量的 10X 電泳緩沖液用 RNase-free 水稀釋 10 倍，得到 1X 電泳緩 沖液待用。
3. 配制 10%過硫酸銨溶液 精確稱取約 100 mg 過硫酸銨到一干凈的 1.5 mL 離心管中，按每 1 mg 過硫酸銨加 10 uL RNase-free 水的比例加入 RNase-free 水，搖晃致溶， 立即使用。注意：放置時間不要超過一周。
二、配制凝膠
1. 估計所需要的凝膠溶液的體積，一般配制一塊 13 cm X 15 cm X 0.8 mm 的膠需要 15 mL 凝膠溶液，配制一塊 36 cm X 45 cm X 0.8 mm 的膠 需要 120 mL 凝膠溶液。
2. 新鮮的 40%的丙烯酰胺-甲叉雙丙烯酰胺溶液的配制：在裝有 60g 丙烯酰 胺干粉的瓶中加入約 130 mL 自備的去離子水，然后將全部甲叉雙丙烯酰 胺加入到同一塑料瓶中（可以加少量丙烯酰胺溶液沖洗出來以避免粉末有 毒粉末飄出。甲叉雙丙烯酰胺溶解度低，不會溶解在這少量溶液中）。充 分搖晃混勻后所得溶液即 40%的 Acrylamide/Bis 溶液。配制 40%而非 30%的原因是這樣可以在下步留出足夠空間加尿素。
3. 根據(jù)所需要的凝膠溶液的體積，在一的干凈的三角瓶中按下表加入各成分
4. 攪拌并加熱到 40-50℃左右，直到尿素*溶解。
5. 冷卻到室溫后，將三角瓶接上真空系統(tǒng)抽真空處理 10-15 分鐘以充分去 除溶液中的氧氣（氧氣會降低聚合反應(yīng)效率）。但如果實驗條件有限，此 步也可以省略。
6. 邊搖晃溶液變加入 50 uL TEMED 和 500 uL 10%過硫酸銨。注意：即 使選擇其他工作濃度的 Acrylamide/Bis，TEMED 和 10%過硫酸銨的用 量也不需要隨之改變。但如果配置的凝膠溶液的體積變化，TEMED 和 10%過硫酸銨的用量也要按比例改變。
7. 再充分搖晃約 30 秒后迅速灌膠，然后插入樣品梳。
8. 室溫放置 30-60 分鐘使膠凝固。
9. 將凝膠板放置在電泳裝置上后，在上下層分別加入適當量的 1X 電泳緩沖 液。如果不馬上使用，需要有濕紙將上樣孔端蓋住以防凝膠過度干燥。
10. 拔出梳子后用加樣槍吸取電泳緩沖液，充分將每個加樣空中未聚合的 Acrylamide/Bis、尿素和氣泡吹打出來。
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL實驗后續(xù)處理：
1. 染色觀察：將凝膠一面的玻璃板揭開，直接用仍然附著在另一玻璃板上的 凝膠進行各種染色，包括銀染（固定、漂洗、顯影和定影等步驟）、EB（每 100 mL 1×TBE 中加 20 uL 10mg/mL 的 EB 溶液）、天澤基因低毒核 酸染料 DNAgreen（每 100 mL 1×TBE 中加 10 uL DNAgreen 原液）。 UV 下觀察并拍照。
2. miRNA 回收：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后進行膠回收處理。
3. Northern 雜交：按上法用 EB 等染料染色后，UV 下確定所需要的 miRNA 條帶的位置，切膠后電轉(zhuǎn)移到帶正電的尼龍膜上，然后進行雜交處理。
4. 放射自顯影：如果 miRNA 樣品電泳前經(jīng)過同位素標記，則將凝膠一面的 玻璃板揭開，用濾紙將附著在另一玻璃板上的凝膠吸附過來，然后包上保 鮮膜，真空抽干，然后使膠跟 X 光片向?qū)χ眠M行放射自顯影。
人扁桃體上皮細胞HTEpiC

HA Others H5N9 甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)

雪羊皮膚細胞;SSHS1

倉鼠源細胞 管癌細胞，T-47D細胞 B6YH4細胞，雜交瘤細胞支原體陽性

QBC-939, 人膽管癌細胞 Human

SFTPD Others Cynomolgus 食蟹猴 SFTPD / COLEC7 / Collectin-7 人細胞裂解液 (陽性對照)
LILRA5 Others Rat 大鼠 LILRA5 人細胞裂解液 (陽性對照)

人虹膜色素上皮細胞RNAHIPEpiC miRNA5 μg

人心室肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

PC-12細胞，大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) 22RV1(前列腺癌細胞) 人肝癌細胞;SMMC-7721

PF4 Protein Human 重組人 CXCL4 / PF4 蛋白

STO(小鼠胚成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL18RAP / IL1R7 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
人虹膜色素上皮細胞RNAHIPEpiC miRNA5 μg

LILRA5 Others Rat 大鼠 LILRA5 人細胞裂解液 (陽性對照)

人心室肌細胞*培養(yǎng)基 100mL

PC-12細胞，大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) 22RV1(前列腺癌細胞) 人肝癌細胞;SMMC-7721

PF4 Protein Human 重組人 CXCL4 / PF4 蛋白

STO(小鼠胚成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL18RAP / IL1R7 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
Anti-Skp2/FITC 熒光素標記細胞S相激酶相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

一氧化氮合成酶-2抗體 Anti-NOS-2/iNOS 0.1ml

5-HT/5 Hydroxy Tryptophan 英文名稱： 5羥色胺抗體 0.1ml

EME1 英文名稱： 減數(shù)分裂內(nèi)切酶EME1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser6) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗馬IgM 0.1ml

FSH receptor 英文名稱： 促卵泡刺激素受體抗體 0.1ml

囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗體 anti-CFTR 0.1ml

Anti-OPGL/RANKL/CD254 /FITC 熒光素標記骨保護蛋白配體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKC delta 蛋白激酶C亞性D型抗體 規(guī)格 0.2ml

Rabbit Anti-pig IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗豬IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
miRNA 尿素 -PAGE 上樣液 ,6×10mL實驗PKB (Rat) 大鼠蛋白激酶BMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-Phospho-EGFR(Thr669) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MyoGEF 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 規(guī)格 0.2ml

Ig-j(Human immunoglubin joining chain) ELISA Kit *j鏈 96T

SPOP 英文名稱： SPOP蛋白抗體 0.2ml

CCKBR 英文名稱： 促胃泌素受體抗體 0.1ml

Anti-Phospho-EGFR(Thr669) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml